Test di motilità per confrontare ceppi di Vibrio cholerae utilizzando cloruro di trifeniltetrazolio

Abstract

Fonte: Brumfield, K. D., et al. Tecniche di laboratorio utilizzate per mantenere e differenziare i biotipi degli isolati clinici e ambientali di Vibrio cholerae . J. Vis. Esp. (2017)

Questo video mostra un saggio sull'agar morbido utilizzando cloruro di trifeniltetrazolio per valutare e confrontare la motilità dei ceppi di Vibrio cholerae visualizzando l'attività metabolica attraverso la formazione della red zone attorno alle cellule attivamente migratorie.

Protocollo

1. Saggio di motilità
   1. Prepara colture notturne di ceppi di Vibrio cholerae in brodo liquido LB (Luria-Bertani).
   2. Comprimere 1,8 mL di coltura notturna per 2 minuti tramite centrifugazione (≥8.600 x g) in un tubo sterile da 2 mL per microcentrifuga e rimuovere il soprantantante usando una pipetta. Risospensa il pellet cellulare in 1,8 mL 1x PBS (soluzione salina tamponata con fosfato) tramite pipetta.
   3. Ripeti la procedura di lavaggio tre volte, seguita da una risospensione finale in 1,8 mL 1x PBS.
   4. Inoculare le placche di agar di motilità inserendo una coltellata inoculante nella coltura liquida lavata e pungendo verticalmente nel mezzo. Tra una vaccinazione e l'altra, sterilizza la pungigliata di filo con un becco Bunsen e, quando infildi l'agar, assicurati che la pungigliata non si pieghi, poiché ciò può alterare i risultati.
   5. Incubare le placche con il coperchio rivolto verso l'alto per 14-24 ore a 37 °C. Dopo 14 ore, monitorare attentamente le placche di motilità per prevenire una crescita eccessiva delle colture.

Materiali