Saggio Voges-Proskauer per la differenziazione dei biotipi di Vibrio cholerae

Abstract

Fonte: Brumfield, K. D., et al., Tecniche di laboratorio utilizzate per mantenere e differenziare i biotipi degli isolati clinici e ambientali di Vibrio cholerae . J. Vis. Esp. (2017).

Questo video dimostra il test Voges-Proskauer (VP) per differenziare tra tre biotipi di Vibrio cholerae: classico, tipo selvatico El Tor e variante El Tor. Ogni coltura viene inoculata in un mezzo contenente glucosio, incubata e trattata con α-naftolo e idrossido di potassio per rilevare la presenza di acetoina. Un colore rosato-rosso, che indica una reazione VP positiva, si osserva solo nel biotipo selvatico El Tor, distinguendolo dai tipi classici e varianti.

Protocollo

Analisi Voges-Proskauer (VP)

1. Prepara colture notturne in brodo liquido LB.
2. Inoculare 4 mL di brodo Voges-Proskauer rosso di metile, o brodo MR-VP, pipettando 10 μL di coltura pre-notturna in un brodo MR-VP da 4 mL in un tubo sterile e incubare con aerazione in un incubatore shaker a 225 giri/min per 12-16 ore a 37 °C.
3. Aggiungere 150 μL di α-naftolo al 5% (a/v) e 50 μL di KOH al 40% (w/v) a 1 mL di aliquote di coltura notturna MR-VP in tubi di coltura sterili, rispettivamente.
4. Formare brevemente un vortice e lasciarlo a temperatura ambiente fino a 4 ore finché non si sviluppa un cambiamento di colore.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
MR-VP Broth	Difco	216300	http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=216300&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3Dmr-vp%2Bmedium%26typeOfSearch%3DproductSearch
KOH	Fisher Scientific	P250-500	https://www.fishersci.com/shop/products/potassium-hydroxide-pellets-certified-acs-fisher-chemical-5/p250500?searchHijack=true&searchTerm=P250500&searchType=RAPID
α-napthol	MP Biomedici	204189	http://www.mpbio.com/product.php?pid=05204189