Analisi precisa e ad alta produttività della crescita batterica utilizzando un lettore di microplacche

Abstract

Fonte: Kurokawa, M., et al. Analisi precisa e ad alto rendimento della crescita batterica. J. Vis. Esp. (2017)

Questo video dimostra la quantificazione ad alta produttività della crescita batterica utilizzando un lettore di microplacche. Descrive i passaggi coinvolti nella preparazione della coltura, nella misurazione della densità ottica e nell'analisi della dinamica della crescita.

Protocol

1. Registrazione in tempo reale della crescita
   1. Traccia un pittogramma di piastra a 96 pozzi (tabella 8 × 12) per indicare le posizioni dei campioni di coltura inoculata sulla piastra a 96 pozzi. Stampa la tabella e usala come riferimento per l'esperimento.
      NOTA: I pozzi situati ai bordi della micropiastra dovrebbero contenere solo un mezzo vuoto a causa dell'evaporazione.
   2. Posizionare una micropiastra sterilizzata a fondo piatto a 96 pozzi con coperchio, punte di pipetta P-1000, 1000 μL, P-200, 200 μL, diversi microtubi da 1,5 mL, una pipetta multicanale a 8 canali, un serbatoio di reagente sterilizzato, M63 a temperatura ambiente e le scorte di glicerolo di Escherichia coli su un banco pulito.
   3. Aggiungere circa 25 mL M63 al serbatoio del reagente. Usa questo serbatoio per tutti i passaggi seguenti.
   4. Aggiungere 900 μL M63 ai microtubi in preparazione alla produzione di diluizioni seriali.
   5. Scongela la scorta di glicerolo a temperatura ambiente. Aggiungi 900 μL di M63 alla scorta di glicerolo scongelata e al vortice. Questo comporta una diluizione di 10 volte del stock originale di glicerolo.
   6. Trasferire 100 μL della diluizione a 10 volte in un altro microtubo contenente 900 μL di M63 e vortice. Questo comporta una diluizione di 100 volte.
   7. Ripeti il passo 1.6 fino a raggiungere il numero desiderato di diluizioni.
   8. Riempire i pozzi ai margini della micropiastra con 200 μL M63 utilizzando una pipetta a 8 canali (P-200).
      NOTA: Questi pozzi possono essere usati come blank.
   9. Carica 200 μL di ciascun campione diluito preparato nei passaggi 1.4 - 1.7 ai pozzi delle micropiastre secondo la tabella di riferimento (passo 1.1). Vortice i campioni diluiti prima di caricarli e carica lo stesso campione in più pozzi in diverse posizioni della piastra di qualità.
   10. Posiziona la micropiastra a 96 pozzi sul lettore di piatta.
   11. Apri "Leggi ora" in "Gestione Attività" e scegli il programma. Clicca su "OK" per iniziare a misurare. Salva la registrazione come nuovo file sperimentale per l'analisi dei dati.

Materials