Quantificazione della fuozione batterica per valutare il potenziale di trasmissione dell'infezione in Drosophila

Abstract

Fonte: Siva-Jothy, J. A., et al., Infezione batterica orale e caduta, in Drosophila melanogaster. J. Vis. Esp. (2018)

Questo video mostra la procedura per monitorare la fuozione batterica in Drosophila trasferendo una mosca infetta attraverso più tubi contenenti cibo, recuperando i batteri eliminati e quantificando le colonie vitali tramite diluizione seriale e placcaggio.

Protocollo

1. Misura la fuoriuscita batterica
   1. Misura la perdita di capelli insieme al carico interno.
   2. Dopo l'infezione, trasferire mosche singole in tubi microcentrifuga da 1,5 mL contenenti ~50 μL di mezzo Lewis per 24 ore.
   3. Rimuovere le mosche per la misurazione del carico interno e lavare i tubi con 100 μL di 1x PBS (soluzione salina tamponata con fosfato) vorticando intensamente per 3 secondi.
   4. Misurare le CFU (unità formative di colonie) in questo lavaggio impiegando un agar nutritivo LB (Luria-Bertani).
   5. Dopo l'infezione, trasferire mosche singole in tubi microcentrifuga da 1,5 mL contenenti ~50 μL di mezzo Lewis per 24 ore.
   6. Trasferire le mosche in nuovi tubi microcentrifughe contenenti ~50 μL di mezzo Lewis per altre 24 ore. Lavare i tubi contaminati con 100 μL di 1x PBS vorticando intensamente per 3 secondi.
   7. Misura le CFU in questo lavaggio impiacciando un agar nutritivo LB.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Fiale	Sarstedt Ltd.	58.49	Tubo a base piatta in polistirene 75mm x 23,5mm, 23ml
Agar	Sigma-Aldrich	A7002	Agar, cenere 2,0-4,5%
Zucchero di canna	Bidvest	66032	Zucchero di canna tenera chiara
Mais	La Fattoria della Colomba		Farina di mais biologica
Lievito fermipano	Bidvest	96360	Lievito secco e istantaneo
Piastre di Petri	Fisher Scientific UK Ltd.	15788517	X600 piastra di Petri 90 x 16,2 mm sterile triple ventilazione
Tubo Eppendorf (1,5 ml)	Sarstedt Ltd.	72.690.001	Capsula spinta Conica a tubo Micro Sarstedt 1,5ml Standard neutro
Etanolo	VWR International Ltd.	20821.33	ETANOLO ASSOLUTO ANALAR NP ACS/R.PE - Grado Analitico
Brodo LB, Miller	Fisher Scientific UK Ltd.	BP1426	Contiene 10g di triptone, 5g estratto di lievito, 10g di cloruro di sodio per litro
Micropiastra a 96 pozzi	Forniture di Laboratorio Scientifico Ltd.	353072	Micropiastra di coltura cellulare in polistirene trattata con TC e basi ben trasparenti Falcon 96 Well Clear e con coperchio sterile
Vortice	Fisherbrand		Whirlimixer 75W 50-6-Hz 220-240V
Punte a pipetta da 10 μL	Greiner Bio-one Inc	741015	Carica facilmente in stile Gilson. Graduato, pulito, ricaricato, 960 pezzi
Punte per pipette da 200 μL	Greiner Bio-one Inc	741065	Carica facilmente in stile Gilson. Graduato, pulito, ricaricato, 960 pezzi
Punte per pipette da 1000 μL	Greiner Bio-one Inc	741045	Carica facilmente in stile Gilson. Graduato, pulito, ricaricato, 960 pezzi
Punte di pipetta filtrate da 20 μL	Greiner Bio-one Inc	774288	Punta del filtro stile Gilson. Trasparente, rack blu, confezionamento singolo, senza R/Dnase, 10 rack da 96 pezzi
Punte di pipetta filtrate da 200 μL	Greiner Bio-one Inc	739288	Punta del filtro stile Gilson. Trasparente, rack blu, confezionamento singolo, senza R/Dnase, 10 rack da 96 pezzi
Punte di pipetta filtrate da 1000 μL	Greiner Bio-one Inc	740288	Punta del filtro stile Gilson. Trasparente, rack blu, confezionamento singolo, senza R/Dnase, 10 rack da 60 pezzi