Iniezione intraperitoneale di lipopolisaccaride batterico nei topi per studiare le risposte immunitarie sistemiche

Abstract

Fonte: Radulovic, K., et al. Iniezioni di lipopolisaccaridi nei topi per imitare l'ingresso di prodotti derivati da microbi dopo la rottura della barriera intestinale. J. Vis. Esp. (2018)

Questo video mostra una procedura passo dopo passo per iniettare lipopolisaccaridi (LPS) nei topi intraperitonealmente per indurre infiammazione sistemica.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato locale istituzionale per la cura degli animali e dal comitato veterinario JoVE.

1. Iniezione intraperitoneale di lipopolisaccaridi (LPS) sui topi
   1. Aspirare la soluzione operativa LPS in una siringa da 0,5 mL con un ago da 30 G in un flusso d'aria laminare.
   2. Pesa le femmine di C57Bl/6 topi (tra le 6 e le 10 settimane di età) e calcola la quantità di LPS che verrà iniettata: 10 μL (2 μg)/g di peso corporeo.
      NOTA: Ad esempio, se un topo pesa 20 g, allora è necessario iniettare una soluzione di lavoro LPS di 20 g x 10 μL = 200 μL.
   3. Maneggia il topo con delicatezza ma fermezza e immobilizza l'animale con una mano. Assicurati che l'animale possa respirare normalmente ma non contorcersi durante la restrizione.
   4. Inclina leggermente il naso del topo verso il pavimento per esporre l'addome all'iniezione. Individua la linea mediana dell'addome e il punto di iniezione nella parte bassa dell'addome, a sinistra o a destra rispetto alla linea mediana. Iniettare soluzione fisiologica tamponata con fosfato (PBS) intraperitoneale (i.p.) invece di LPS nei topi controllo.
   5. Con la mano libera, inietta il volume appropriato (il volume calcolato nello step 1.2) della soluzione di lavoro LPS. Assicurati che l'ago sia entrato nella cavità peritoneale, altrimenti potrebbero verificarsi ingiustie sbagliate nello strato muscolare addominale. Tuttavia, non andare troppo in profondità con l'ago nella cavità peritoneale per evitare di danneggiare organi interni situati in quella zona.
   6. Riporta con cura l'animale nella gabbia con un massimo di 5 topi per gabbia.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
LPS Escherichia coli O111:B4	Invivogen, San Diego, CA, USA.	tlrl-eblps
Omnican 50 Siringa monouso per insulina	B. Braun Melsungen, Melsungen, Germania	9151125