Preparazione di una coltura emolitica di Staphylococcus aureus per studi di interazione ospite-patogeno

Abstract

Fonte: Behera, R.K. et al., Un metodo basato sulla fluorescenza per studiare la regolazione genica batterica nei tessuti infetti. J. Vis. Esp. (2019)

Questo video dimostra la preparazione di colture emolitiche di Staphylococcus aureus per standardizzare la crescita batterica e raggiungere la sincronizzazione metabolica per studi di interazione ospite-patogeno.

Protocollo

1. Preparazione dell'inoculo batterico
   1. Ceppi di Staphylococcus aureus di interesse per l'isolamento su piastre di agar sanguigno da una scorta di glicerolo congelata. Incubare a 37 °C per 16–24 ore per confermare fenotipi emolitici basati sulla loro capacità di lisare globuli rossi (globuli rossi) e formare zone trasparenti e trasparenti.
   2. Iniziare le colture notturne inoculando singole colonie di ciascun ceppo su 4 mL di brodo di soia triptico (TSB) in tubi di vetro sterili. Ruota i tubi a 37 °C per 16–24 ore in un rullo a tubo posizionato a un angolo approssimativo di 70° e a 70 rotazioni al minuto (RPM).
   3. Usa uno spettrofotometro per misurare la densità ottica a 600 nm (OD₆₀₀) delle colture del passaggio 2.1.2. Usa un mezzo sterile come riferimento ottico (blank). Diluire queste cellule a un OD₆₀₀ di 0,05 in 25 mL di Brodo di Soia Triptico (TSB) sterile in fiaschette DeLong separate da 125 mL (rapporto 5:1 fiaschella/volume) e incubare le colture in un bagno d'acqua (per un corretto trasferimento di calore alle colture), agitando a 280 RPM e impostando a 37 °C.
      NOTA: La crescita dell'inoculo può essere effettuata in vari modi; Viene presentato un metodo per far crescere le cellule fino alla fase esponenziale. In ogni caso, è importante utilizzare costantemente lo stesso metodo per preparare le cellule all'inoculazione.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
5% Sangue di pecora	Hardy Diagnostics (Santa Maria, CA)	A10
Bagno d'acqua oscillante orbitale	New Brunswick Innova	NA
Brodo di soia triptico	VWR	90000-376
Spettrofotometro visibile a UV	Beckman Coulter-DU350	NA