Imaging in tempo reale delle interazioni ospite-patogeno in embrioni di pesce zebra infettati da Mycobacterium abscessus

Abstract

Fonte: Bernut, A., et al. Decifrazione e imaging della patogenesi e cordaggio di Mycobacterium abscessus negli embrioni di pesci zebra. J. Vis. Esp. (2015)

Questo video dimostra un protocollo che utilizza embrioni transgenici di pesci zebra che esprimono macrofagi fluorescenti e infettati dal ceppo ruvido fluorescente Mycobacterium abscessus per visualizzare le interazioni ospite-patogeno. Rivela come il cordone extracellulare permetta l'evasione immunitaria, favorendo la sopravvivenza batterica e il danno alle cellule ospiti.

Protocollo

1. Imaging dal vivo dell'infezione da M. ascesso

1. Mount tricaine-anestetizzò embrioni in agarosio a basso punto di fusione al 1% in una piastra di Petri da 35 mm prima delle osservazioni microscopiche a epifluorescenza. Usa una piastra di vetro per la microscopia confocale invertita o una vetrina a depressione a cavità singola per la microscopia confocale verticale. Orientare l'embrione nella posizione desiderata e coprire l'agarosio solidificato con acqua di pesce contenente tricaina.
2. Utilizzare un microscopio a epifluorescenza con obiettivo 10X per acquisizione e trasmissione di fluorescenza sequenziale dell'intero embrione. In alternativa, si utilizza un microscopio confocale con obiettivi 40X o 63X per visualizzare l'attività delle cellule immunitarie dopo un'infezione.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Agaroso a bassa fusione	Sigma-Aldrich
Sale di metanosulfonato etil 3-aminobenzoato (Tricaine)	Sigma-Aldrich	A5040