Esecuzione di cromatografia a strato sottile per valutare la degradazione degli esopolisaccaridi batterici

Abstract

Fonte: Hu, Y., et al. Analisi delle interazioni tra endobiotici e microbiota intestinale umano utilizzando sistemi di fermentazione in vitro in bath. J. Vis. Esp. (2019)

Questo video dimostra l'uso della cromatografia a strato sottile (TLC) per valutare la degradazione degli esosaccacaridi (EPS) da parte del microbiota fecale umano. I frammenti di EPS nei supernatanti di fermentazione vengono separati in base a dimensione e polarità tramite TLC, poi visualizzati come bande colorate dopo una colorazione specifica per carboidrati.

Protocollo

1. Degradazione degli esosaccacaridi (EPS) da parte del microbiota fecale umano

1. Carica 0,2 μL di soprantativi fermentati su piastre di cromatografia a strato sottile (TLC) in gel di silice pre-rivestite, poi asciuga con un phon.
2. Sviluppare le piastre in 20 mL di una soluzione di acido formico/n-butanolo/acqua (6:4:1, v:v:v) e asciugare con un phon.
3. Immergi le piastre nel reagente Orcinol per tingere, poi asciuga con un phon.
   1. Prepara i reagenti di orcinol sciogliendo 900 mg di liquenolo in 25 mL di acqua distillata, poi aggiungendo 375 mL di etanolo. Di conseguenza, l'acido solforico concentrato dovrebbe essere aggiunto lentamente e la soluzione ben miscelata.
4. Riscalda i piatti a 120 °C per 3 minuti in un forno da cottura e valuta il degrado dell'EPS misurando le bande TLC.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Forno da forno	Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd	DHG-9240A	Usare per riscaldare e cuocere al forno
Etanolo	Sigma-Aldrich	E7023	Uso per preparare la vitamina K1
Acido formico	Sigma-Aldrich	399388	Usato per le cure affettuose
Lichenolo	Solarbio	C8380	Uso per preparare la lastra colorata
n-Butanolo	ChemSpider	71-36-3	Usato per le cure affettuose
Orcinol	Sigma-Aldrich	447420	Usato per preparare reagenti di orcinolo
Acido solforico	Sigma-Aldrich	150692	Usato per preparare reagenti di orcinolo
Lastre di alluminio TLC	MerckMillipore	116835	Usato per le cure affettuose