Quantificazione del carico batterico tissutale in un modello murino di infezione intestinale cronica

Abstract

Fonte: Lo, B.C., et al. Fibrosi intestinale indotta da Salmonella cronica. J. Vis. Esp. (2019)

Il video dimostra la quantificazione del carico batterico in un modello murino di infezione cronica da Salmonella typhimurium resistente alla streptomicina. Dopo l'eutanasia e la dissezione sterile, i tessuti cecali e splenici vengono prelevati, omogeneizzati con perle d'acciaio per rilasciare batteri e diluiti in serie di teste. Le diluizioni vengono placcate su agar selettivo e le colonie visibili vengono conteggiate per stimare il carico batterico per grammo di tessuto nei siti intestinali e sistemici.

Protocol

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato locale istituzionale per la cura degli animali e dal comitato veterinario JoVE.

1. Preparazione di colture di Salmonella Typhimurium ΔAroA per il gancio orale dei topi

1. Da una scorta di glicerolo congelata di S. Typhimurium ΔAroA, preparare una piastra striata utilizzando agar Luria-Bertani (LB agar) contenente 100 μg/mL di estreptomicina con un anello inoculante sterile. Incubare durante la notte a 37 °C. Le piastre striate possono essere conservate fino a una settimana a 4 °C.
2. Un giorno prima dell'infezione, prepar....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Tubi di blocco di sicurezza con fondo rotondo da 2 ml	Eppendorf	22363344
Perline in acciaio inossidabile	Qiagen	69989
PBS	Gibco	10010031
Punte per pipette a grande orifizio	Fisher	2707134
Piastre megablocco da 2 mL	Sarstedt	82.1972.002
Aghi da gavage	FST	18061-22
Solfato di streptomicina	Sigma	S9137
Mulino miscelatore	Retsch	MM