Preparazione di una coltura batterica del suolo per infezioni da batteriofagi

Abstract

Fonte: Cross, T., et al., Una tecnica di arricchimento ottimizzata per l'isolamento delle specie di batteriofagi arthrobacter da isolati di campioni di suolo. J. Vis. Esp.(2015)

Questo video dimostra la preparazione di una coltura batterica per la produzione di batteriofago. Copre le fasi di inoculazione di un batterio del suolo in una fiaschetta a sfondo, favorendo una crescita uniforme tramite aerazione e scuotimento e monitorando la densità cellulare tramite misurazioni ottiche della densità. Una volta che la coltura raggiunge la fase ottimale di crescita, è pronta per una produzione efficiente di batteriofagi.

Protocollo

Preparazione delle cellule artrobattere per l'isolamento dei fagi

• Coltura Arthrobacter sp. Colonie KY3901 striate su una piastra agar Luria Bertani (LB) incubate a 30 °C per 2-3 giorni. Scegli una colonia e usa un anello sterile per aggiungerla a 250 ml di brodo LB in una fiaschetta di coltura con sfondimenti e incubare in un incubatore a 225 giri al minuto a 30 °C.
• Consentire circa 24 ore di crescita per ottenere cellule di fase esponenziale tardiva/stazionaria iniziale per esperimenti di infezione con fagi. Monitorare attentamente lo stato della crescita batterica per impedire alle cellule di entrare nello stato di crescita stazionaria medio-tarda.
  NOTA: La crescita cellulare dovrebbe consistere in una densità ottica OD₆₀₀ compresa tra 0,5 e 0,0,7 per le procedure/passaggi di isolamento e purificazione del fagio.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
LB Broth powder	Fisher	BP9722-2
Agar granulato	Fisher	BP1423-2
Tubi Eppendorf	Fisher	05-408-129
Pipete da 5 ml singole	Fisher	13-678-11D
Tubi conici da 50 ml	Fisher	76002844
Tubi conici da 15 ml	Fisher	76002845
Pipete da 10 ml singole	Fisher	13-676-10J
25 ml pipete singole	Fisher	13-676-10K