Infezione delle vie urinarie associata al catetere in un modello murino

Abstract

Fonte: Conover, M. S., et al., J. Stabilimento e caratterizzazione di UTI e CAUTI in un modello murino. J. Vis. Esp. (2015)

Questo video mostra la procedura per assemblare e impiantare un catetere transuretrale in una topolina, seguita da un'inoculazione batterica per stabilire infezioni urinarie associate al catetere e indagare le interazioni ospite-patogeno mediate dal biofilm.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato locale istituzionale per la cura degli animali e dal comitato veterinario JoVE.

1. Protocollo modello CAUTI (Infezione delle vie urinarie associata al catetere), Preparazione dell'ago del catetere per il modello CAUTI

1. Rimuovi il tappo dell'ago da 30 G. Taglia un pezzo di tubo in PE10 da 7 mm (polietilene 10) e un pezzo di tubo in silicone da 5 mm come RenaSIL. Infila l'ago con tubi in PE10 finché il tubo non tocca la base dell'ago.
2. Poi alimenta il pezzo da 5 mm sull'ago contenente PE10. Sterilizza gli insiemi di aghi con i raghi UV durante la notte.
   NOTA: Quando si carica il tubo in silicone, lascia circa 1 mm del tubo che si estenda oltre la punta dell'ago.

2. Preparazione dell'inoculo batterico E. faecalis OG1RF

1. Prepara l'inoculo OG1RF a partire da 48 ore prima del giorno dell'inoculazione. Striscia OG1RF su una piastra BHI (brain heart infusion) da un calcio congelato.
2. Scegli una colonia e inoculala in 10 ml di BHI e coltivala staticamente per 18 ore a 37 °C. Centrifuga la coltura e lava la pellet (3 volte) in volumi da 1 ml di PBS sterile 1x.
3. Risospendi la pellet batterica in 1x PBS (soluzione salina tamponata con fosfato). Misura la densità ottica batterica e regola la concentrazione alla dimensione desiderata dell'inoculo. La concentrazione standard dell'inoculo utilizzato è^10,7; Tuttavia, questo può variare a causa del design dello studio

3. Impianto di catetere

1. Pulisci la postazione con etanolo al 70% e copri l'area con un copricapo assorbente (oppure usa una cappa a flusso sterile).
2. Attaccare un ago del catetere a una siringa vuota da 1 ml (TB o tubercina). Taglia un pezzo quadrato di parafilm da 1 pollice e metti una punta di lubrificante chirurgico (circa della dimensione di una moneta da dieci centesimi) sopra.
   NOTA: Due aghi diversi vengono utilizzati per la deposizione del catetere e per l'inoculo, al fine di minimizzare l'inoculazione accidentale dovuta alla manipolazione meccanica necessaria per l'impianto del catetere. Questo consente anche la comodità di preparare meno aghi da inoculazione.
3. Anestetizzare i topi C57BL/6 mettendoli in un barattolo di vetro da 32 once contenente una pallina infusa per tè con palline di cotone imbevute in 3 ml di isoflurano o in una camera vaporizzatore (seguendo il protocollo del produttore) fino a svenire ma respirare normalmente (1 respiro al secondo).
4. Poi metti il topo sulla schiena su un tovagliolo di carta e allarga le zampe. Copri il naso del topo con un cono nasale o un tubo conico da 50 ml con palline di cotone contenenti una piccola quantità (circa 1-2 ml) di isoflurano.
   ATTENZIONE: L'isoflurano è un anestetico inalatorio. Da utilizzare in un'area ben ventilata e ridurre al minimo l'inalazione da parte del ricercatore.
5. Palpa delicatamente la vescica per indurre la minzione e assicurarti di evacuare la vescica. Pulisci l'area periuretrale con una salvietta al 100% etanolo.
6. Disinfettare l'area periuretrale con una soluzione al 10% di povidone-iodio utilizzando un applicatore a punta di cotone. Tampona l'ago/siringa di inoculazione, punta prima, nel lubrificante chirurgico.
   NOTA: Il povidone-iodio viene utilizzato per l'impianto del catetere, che è una soluzione asettica più potente rispetto all'alcol. L'impianto del catetere richiede una maggiore manipolazione meccanica per inserire il catetere e quindi ha un potenziale maggiore di contaminazione.
7. Inserisci il catetere nell'apertura uretrale. Una volta dentro, usa una pinzetta per spingere il pezzo lungo 7 mm PE10 verso la vescica, spingendo così il piccolo catetere (silicone da 5 mm) e depositandolo nella vescica. Rimuovi immediatamente l'ago, con il tubo da 7 mm ancora attaccato.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Materiale per la preparazione di catetere e ago:
Aghi da 30 G	BD Precision Glide	305106	30 G x 1/2 (0,3 mm x 13 mm)
Tubi in polietilene PE10	BD	427400	Diametro interno -0,011 in (0,28 mm); diametro esterno – 0,024 in (0,61 mm)
RenaSIL 025 tubi in silicio platino polimerizzato	Braintree Scientific, Inc	COGNATA 025	Diametro interno - 0,012 x diametro esterno 0,025, bobina 25 ft
Materiale per le infezioni:
Isofluorano – Isotesia	Maggiordomo Schein	29405	250 ml
Barattolo a lati dritti in vetro trasparente	Inseguimento di Kimble	5413289V 21
Infusore di tè in acciaio inossidabile	Schefs-Amazon		Infusore Premium in foglia sfusa di Schefs - Acciaio inox - Ampia capacità -
Palline di cotone non sterili	Fisherbrand	22-456-880
Tubi Falcon da 50 ml	VWR	89039-660
Isotec 3 - vaporizzatore	Ohmeda	1224478
Pugno all'orecchio	Fisher Scientific	13-812-201	(quando necessario)
Soluzione di betadine	Soluzione di betadine		Soluzione topica Povidie-iodio al 10%
Cotton fioc	Fisher Scientific	22-037-924	6 pollici
Pannolini per panca	Fisherbrand	14206 63	Sottopad assorbenti (tappetini 20"X36")
Lubrificante chirurgico	Surgilube	0281-0205-36
Forbici dissezionatrici	Strumenti scientifici di qualità, INC	14084-08
Pinze Micro-Adson	Strumenti scientifici di qualità, INC	11018-12
1 ml di siringa	BD	309659	Punta scorrevole per tubercolina
Parafilm	Bemis	PM996	4 pollici x 125 piedi
Rastrelliere Eppendorf	Fisherbrand	05-541-1
Tubi di Eppendorf	MIDSCI	AVX-T-17-C
Prelievo di cateteri, vesciche e reni:
Omogeneizzatore	PRO Scientific INC	Bio-Gen Pro 200
Tubo a fondo rotondo in polipropilene da 5 ml	BD	352063	per l'omogeneizzazione degli organi
Carta assorbente	Georgia-Pacific
Etanolo	Pharmco-AAPER	11100020S	200 proof
™ Piastre Costar Clear Polystyrenne a 96 pozzi	Corning	3788
1x Fosfato salino sodio	Sigma-Aldrich	P3813
Purificatore a ultrasuoni BRANSONIC 1210	Branson Ultrasonics Corporation	1210