Terapia con luce blu per infezioni batteriche resistenti ai farmaci in ustioni in un modello topino

Abstract

Fonte: Wang, Y., et al. Indagine in vivo della terapia antimicrobica con luce blu per infezioni da ustioni da Acinetobacter baumannii multi-resistente ai farmaci utilizzando imaging bioluminescenze. J. Vis. Esp. (2017)

Questo video mostra la procedura per trattare le infezioni da ustioni causate da batteri bioluminescenti e resistenti ai farmaci nei topi utilizzando la terapia con luce blu, seguita da immagini bioluminescenti per monitorare l'efficacia del trattamento.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato locale istituzionale per la cura degli animali e dal comitato veterinario JoVE.

1. Terapia antimicrobica con luce blu per infezione da A. baumannii nei topi

1. Anestesiare i topi con un'iniezione intraperitoneale di un cocktail ketamina-xilazina (100 mg/kg - 20 mg/kg). L'assenza del riflesso palpebrale suggerisce una profondità anestetica adeguata.
2. Dividere casualmente i topi in un gruppo trattato con aBL (n = 10) e un gruppo di controllo non trattato (n = 10).
3. Per il gruppo trattato con luce blu antimicrobica (aBL), copri gli occhi dei topi con della carta di alluminio per evitare una sovraesposizione alla luce. Posizionare le bruciature del topo direttamente sotto il diodo emettente di luce (LED), con il coperchio di una piastra di Petri da 35 mm sotto l'addome del topo per mantenere la schiena orizzontale.
4. Sostituisci il misuratore di potenza/energia menzionato nel passo 3.5 con un mouse su una piastra di Petri quadrata. Regola l'altezza del mouse in una posizione in cui la distanza tra l'apertura del LED e la superficie della combustione del mouse sia uguale a quella tra l'apertura del LED e il livello del sensore luminoso del misuratore di potenza/energia.
5. Irradia le ustioni infette a un'irradianza di 100 mW/^cm2. Somministrare aBL in dosi di 72 J/cm² fino a raggiungere una dose totale di 360 J/^{cm 2} (ad es. 0, 72, 144, 216, 288 e 360 J/^{cm 2}). Dopo ogni dose di luce, esegui immagini bioluminescenze per i topi.
6. Per il gruppo di controllo non trattato, eseguire l'imaging bioluminescente delle ustioni del muro, utilizzando gli stessi intervalli di tempo utilizzati per il gruppo trattato con aBL.
7. Prima del recupero dei topi, posizionali sul letto chirurgico riscaldato ad acqua per prevenire la perdita di calore e l'ipotermia. Osserva l'attività e il riflesso palpebrale dei topi fino al recupero. Dopo il recupero dei topi, ospitali 2-3 per gabbia.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
IVIS	PerkinElmer Inc, Waltham, MA	IVIS Lumina Serie III	Imaging preclinico in vivo
LED a diodo a emissione luminosa	VieLight Inc, Toronto, Canada	415 nm	Sorgente luminosa per l'illuminazione
Contatore di potenza/energia	Thorlabs, Inc., Newton, NJ	PM100D	Rivelatore di irradianza luminosa
Mouse	Laboratori Charles River, Wilmington, MA	BALB/c	7-8 settimane di età, peso 17-19 g
Acinetobacter baumannii	Centro Medico Militare Brooke, Fort Sam Houston, TX	Isolato clinico	Ceppo luminescente ingegnerizzato
Soluzione salina tamponata con fosfato, 1x soluzione	Fisher Scientific	BP24384	Un tampone fosfato standard utilizzato in molte procedure biomolecolari
Punte Fisher Scientific Redi-Tip per pipette, 1-200 μL	Fisher Scientific	02-707-502	Punte per pipette
Blocco in ottone	Small Parts, Inc., Miami, FL	10 mm per 10 mm	Per la creazione di ustioni nei topi
Guanti Extreme Dragon PBI/Kevlar ad alta temperatura	Superior Glove Works Ltd, Cheektowaga, NY	PBI83514	Guanti resistenti al calore
Piatti Greiner	Sigma-Aldrich Co. LLC	P5112-740EA	35 mm ×10 mm
Piastra Elettrica Digitale Corning	Cole-Parmer Instrument Company, LLC	UX-84301-65	10" x 10", 220 VAC, per acqua bollente
Letto chirurgico riscaldato ad acqua per topi/ratti	Sistemi E-Z	EZ-211	Previene la perdita di calore e l'ipotermia durante l'intervento chirurgico
Pomata veterinaria	S&K Pharma, GmbH	Kerato Biciron 5%, Augensalbe	Pomata optalmica per prevenire la secchezza oculare