Imaging dei cambiamenti morfologici nei batteri utilizzando la microscopia a fluorescenza a cellule vive

Abstract

Fonte: Brzozowski, R. S. et al. Microscopia a fluorescenza a cellule vive per indagare la localizzazione delle proteine subcellulari e i cambiamenti morfologici cellulari nei batteri. J. Vis. Esp. (2019)

Questo video dimostra la microscopia a fluorescenza a cellule vive per visualizzare cambiamenti morfologici in tempo reale nei batteri. Descrive i passaggi coinvolti nell'imaging, nell'acquisizione del time-lapse e nella deconvoluzione per ottenere immagini ad alta risoluzione in tempo reale.

Protocol

1. Imaging

1. Il giorno dell'esperimento, accendi il sistema di microscopio. Avvia il software di imaging (vedi Tabella dei Materiali) cliccando sull'icona appropriata sul desktop. Inizializza il microscopio cliccando sull'opzione Inizializza microscopio (pulsante raffigurato con un microscopio) nella finestra di avvio del software. Assicurarsi che l'obiettivo sia completamente abbassato utilizzando la regolazione grossolana del microscopio prima dell'inizializzazione.
   NOTA: Dopo l'inizializzazione, dovrebbero apparire tre finestre di dialogo aggiuntive oltre al menu start: resolve3D, raccolta dati e monitora....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Agarose	BioReagenti Fisher	BP160-100	Grado di Biologia Molecolare - Basso EEO
FM4-64	Invitrogen	T3166	Microscopia
Piatto con fondo di vetro	MatTek	P35G-1.5-14-C	Microscopia
Microscopio	GE	DeltaVision Elite	Supporto personalizzato per microscopio rovesciato Olympus IX-71; Torre di illuminazione personalizzata e modulo illuminatore per luce trasmessa. Obiettivi: PLAPON 60X (N.A. 1.42, WD 0.15 mm); OLY 100X OLIO (N.A. 1.4, WD 0.12 mm); DIC Prism Nomarski per obiettivo 100X; CoolSnap HQ2; Assemblaggio SSI a 7 colori; Camera di controllo ambientale - opaca.
PC190723	MilliporeSigma	3445805MG	Inibitore FtsZ
SoftWorx	GE		Software di imaging fornito dal produttore