Immunocolorazione di microlesioni piene di batteri in una sezione di tessuto cardiaco di topo per l'imaging

Abstract

Fonte: Brown, A. O., e Orihuela, C. J. Visualizzazione di Streptococcus pneumoniae all'interno delle microlesioni cardiache e successiva rimodellazione cardiaca. J. Vis. Esp. (2015)

Il video dimostra l'immunocolorazione di sezioni di tessuto cardiaco di topo fissate chimicamente per visualizzare batteri patogeni localizzati all'interno delle microlesioni indotte da infezioni. Il processo include lavaggio dei tessuti, permeabilizzazione della membrana, blocco dei siti aspecifici, marcatura degli anticorpi, controcolorazione nucleare e microscopia confocale per rilevare e localizzare i cluster batterici.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono campioni animali sono state esaminate e approvate dal comitato di revisione etica degli animali competente.

1. Infezione

1. Procura topi BALB/c di entrambi i sessi tra le 10 e le 12 settimane.
   NOTA: Streptococcus pneumoniae sierotipo 4 TIGR4 è un isolato clinico virulento che è stato sequenziato.
2. Coltivare TIGR4 nel brodo Todd-Hewitt a 37 °C con il 5% di CO₂ fino a quando la coltura non raggiunge una densità ottica a 620 nm (OD₆₂₀) di 0,5 (corrispondente a 1,0 × 10 unità formative^{di 8} colonie [CFU]/ml). Granulare la coltura pneumococcica per centrifugazio....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Brodo Todd-Hewitt	Neogen	7161A
O.C.T Compound	Tissue-Tek (Sakura Finetek)	4583
Triton X-100	Fisher Scientific (Acros)	9002-93-1
Siero normale per capre	Abcam	ab7481
Antisiero antisiero-siero-tipo 4 contro il pneumococco	Statens Serum Institut	16747
Anticorpo coniugato anti-coniglio per capra	Jackson ImmunoResearch	111-096-144
DAPI	Invitrogen	D1306
Fluorsave	Millipore	345789
Permount	Fisher Scientific	S70104
Ampicillina	Sigma	A9393
Vedute per microscopio a puntiere tissutali	Polysciences, Inc	24216
Pomata Paralube Vet	Dechra	12920060
Kit per la colorazione di ematossilina ed eosina	non specificato		Standard