Questo video mostra un saggio basato sulla fluorescenza per studiare l'interazione tra un recettore dei macrofagi e gli antigeni di Mycobacterium tuberculosis . Gli antigeni marcati fluorescentmente su un coperchio vengono incubati con estratti proteici di macrofagi, reticolati, marcati da anticorpi e visualizzati tramite segnali di fluorescenza sovrapposti.
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Articolo metodologico
Saggio basato sulla fluorescenza per indagare le interazioni dei recettori dei macrofagi con gli antigeni batterici
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31 marzo 2026
In questo articolo
Abstract
Protocollo
1. Interazione tra Mycobacterium tuberculosis e SLAMF1 tramite microscopia a fluorescenza
- Reticolazione batterio-proteina
- Introdurre coperture rotonde da 12 mm in piastre di coltura a 24 pozzi (1 copertura per pozzo) utilizzando pinzette chirurgiche a muso rotondo.
NOTA: Pulisci accuratamente le coperture con il 70% di etanolo. Se desiderato, possono essere autoclavate o sterilizzate sotto luce UV per 30 minuti. - Incubare il coperchio con 400 μL di 10 μg/mL di Poli-D-Lisina durante la notte a 4 °C. Copri la piastra con carta stagnola pe....
- Introdurre coperture rotonde da 12 mm in piastre di coltura a 24 pozzi (1 copertura per pozzo) utilizzando pinzette chirurgiche a muso rotondo.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Anticorpo secondario Alexa Fluor 488 | Invitrogen | A21121 | Per la microscopia a fluorescenza |
| Anticorpo primario anti-SLAMF1 | BioLegend | 306302 | Per la microscopia a fluorescenza |
| Aqua-Poly/Mount | Poliscienze | 18606-20 | Supporti di montaggio |
| Coperture 12mm | HDA | - | Per il saggio di interazione tramite microscopia |
| EGS | ThermoFisher Scientific | 21565 | Per il trattamento della reticolazione |
| Formaldeide | Merck | K47740803613 | Per il trattamento della reticolazione |
| Vetri in vetro | Glass Klass | - | Per il saggio di interazione tramite microscopia |
| Glicina | Sigma | G8898 | Per il trattamento della reticolazione |
| Imager.A2 | Carl Zeiss | 430005-9901-000 | Microscopio a fluorescenza con modulo di illuminazione Colibri 7 |
| Poli-D-Lisina | Sigma Aldrich | A-003-M | Per il trattamento delle coperte |
| Rhodamine B | Sigma Aldrich | 21955 | Per M. Colorazione per tubercolosi |
