Questo video mostra la procedura del microgavage, in cui una larva di pesce zebra anestetizzata viene immobilizzata nell'agarosio e iniettata oralmente con un batterio patogeno usando un ago guidato da tracciante. Il parto non invasivo imita un'infezione naturale, permettendo di analizzare la replicazione batterica, il rilascio di tossine e il danno epiteliale intestinale.
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Articolo metodologico
Sviluppo di un modello di infezione larvale del pesce zebra utilizzando il microgaffe
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31 marzo 2026
In questo articolo
Abstract
Protocollo
1. Gavage di larve di pesci zebra
- Calibra l'ago microgavage.
- Misura il diametro della punta dell'ago posizionando l'ago su un vetrino di calibrazione con una goccia di olio minerale. Assicurati che la punta abbia un diametro di 30–40 μm, smussa e liscia. Scarta gli aghi appuntiti o ruvidi.
NOTA: I bordi affilati degli aghi possono essere smussati con una fiamma rapida. - Prepara la soluzione del gavage.
- Carica e monta l'ago su un micromanipolatore.
- Regola il micromanipolatore per posizionare l'ago a un angolo di 45°.
- Anestetizzare le larve del pesce zebra. Quando le larve smettono di muoversi, trasferirle nella scanala....
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Agarose | Sigma-Aldrich | A2576 | Agarosio gelificante ultra-basso |
| Agarosi a bassa fusione (LM) | Pronadisa | 8050 | Viene utilizzato nelle lastre di agarosio |
| Vetro capillare | Apparato di Harvard | 30-0019 | Aghi per iniezione |
| Clostridioides difficile | R20291,, una ceppa ribotipo 027, produzione TcdA+/TcdB+/CDT+ | ||
| DMSO | Carl Roth GmbH | A994 | |
| FIJI | Piattaforma open-source | Elaborazione immagini | |
| HEPES | Carl Roth GmbH | 6763 | |
| Tiratore orizzontale per ago | Sutter instrument Inc | P-87 | |
| L-cisteina | Sigma-Aldrich | 168149 | |
| Leica Application Suite X (LAS X) | Leica | Elaborazione immagini | |
| Microiniettore | eppendorf | 5253000017 | |
| Stampi a microiniezione | Strumenti di Scienze Adattive | TU1 | |
| Microscopio confocale Leica SP8 | Leica | ||
| Rosso Fenolo | Sigma-Aldrich | P0290 | |
| Cloruro di potassio (KCl) | Carl Roth GmbH | 5346 | |
| Cloruro di sodio (NaCl) | Carl Roth GmbH | 9265 | |
| Taurocholato | Carl Roth GmbH | 8149 | |
| Tricaine | Sigma-Aldrich | E10521 | |
| Estratto di lievito | BD Bacto | 212750 |
