Monitoraggio della colonizzazione batterica delle radici di Arabidopsis thaliana in un sistema senza suolo

In questo articolo

Abstract

Fonte: Harris, S. L., et al. Monitoraggio della colonizzazione batterica e del mantenimento delle radici di Arabidopsis thaliana in un sistema idroponico galleggiante. J. Vis. Esp. (2019)

Questo video dimostra un protocollo per monitorare la colonizzazione di batteri associati alle radici su piantine di Arabidopsis thaliana coltivate in un sistema senza suolo. Dopo la colonizzazione, i batteri vengono spostati tramite sonicazione, poi diluiti, placcati e incubati per formare colonie che riflettono l'attacco e la vitalità batterica.

Protocollo

Raccolta di batteri per il conteggio cellulare vitale

NOTA: Il numero di batteri per ogni radice di piantina può essere determinato in qualsiasi momento di incubazione. La colonizzazione può essere monitorata tra 0 e 18 ore, mentre la manutenzione può essere monitorata a partire dalle 18 ore.

Rimuovere le piantine dalla rete (Figura 1, passo 5). Posiziona delicatamente le pinze sterilizzate con la fiamma sotto le foglie (ma sul lato della rete della foglia) e pizzica leggermente il fusto. Muovi le piantine verso l'alto e lontane dalla rete per spostare la radice senza romperla. Se la radice si rompe, raschia delicatamente il fondo della rete per raccogliere tutta la lunghezza.
Rimuovi i batteri dalle radici delle piante. Trasferire i batteri nei pozzi di una piastra a 24 pozzi contenente 1 mL di_{ddH 20}. Sonica i campioni.
Quantifica i batteri sulle radici.
1. Eseguire diluizioni seriali di 10 volte dei campioni sonicati fino a una diluizione ^10-6 nel mezzo di crescita batterico. Aggiungi 50 μL di ogni diluizione su singole piastre di agar e spargi con perline di vetro sterili. Incubare le piastre alla temperatura ottimale per i batteri fino a quando le singole colonie non sono numerabili.

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Risultati

Figura 1: Analisi per la colonizzazione batterica e il mantenimento sulle radici di A. thaliana . Le piantine di A. thaliana coltivate su rete plastica sterilizzata sono state trasferite in un mezzo di crescita ottimizzato per bat...