Stabilimento dell'infezione batterica nelle larve di Drosophila

Abstract

Fonte: Hiroyasu, A., D et al., Estrazione di emociti dalle larve di Drosophila melanogaster per infezioni e analisi microbiche. J. Vis. Esp. (2018)

Questo video mostra la procedura per stabilire un'infezione batterica nelle larve di Drosophila inserendole in una goccia batterica e pungendola con un ago di tungsteno. Le larve vengono poi incubate su una piastra agar scanalata e ricca di nutrienti per studiare le interazioni ospite-patogeno.

Protocollo

1. Infezione in vivo

1. Riscalda il piatto di agar di succo di frutta Drosophila a temperatura ambiente per 15 minuti.
   1. Aggiungi 30 g di agar a 700 mL d'acqua e autoclava per 40 minuti.
   2. Sciogliere 0,5 g di parabene metilico in 10 mL di etanolo assoluto.
   3. Aggiungi la soluzione di paraben di metile a 300 mL di concentrato di succo di frutta.
   4. Mescola rapidamente il concentrato di succo nella soluzione di agar autoclavato e distribuisci 5 mL in piastre di Petri da 10 × 35 mm.
   5. Dopo che i piatti si sono raffreddati per 15 minuti, conservali a 4 °C.
2. Prepara le larve di terzo st....

Risultati

Figura 1: Infezione in vivo. A) Piastre di succo di frutta di Drosophila e pasta di lievito vengono utilizzate per l'incubazione delle larve infette in vivo . I tagli vengono effettuati nella piastra di agar per.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Microscopio stereo	Amscope	SM-1BSZ-L6W
Pinza	VWR	82027-402
Coxiella burnetii - mCherry	Dottor Heinzen, R.
Piatti di succo di frutta di Drosophila	Protocolli di Cold Spring Harbor		http://cshprotocols.cshlp.org/content/2007/9/pdb.rec11113.full
Agar	Bioreagenti Fisher	BP1423-500
Parabene metilico	Amresco	0572-500G
Etanolo assoluto	Bioreagenti Fisher	BP2818-500
Concentrato congelato di succo d'uva 100% Welch's, 340 mL	Amazon	B0025UJVGM
Piastre di Petri, 10 x 35 mm	Fisher Scientific	08-757-100A
Lievito, fornificazioni secche attive	MP Biomedici	210140001	Aggiungi 2 parti d'acqua a 1 parte di lievito (v/v)
Ago di tungsteno	Strumenti scientifici di qualità	10130-20
Tenere le pinze	VWR	HS8313
Listeria monocytogenes	ATCC	deformazione: 10403S	Il ceppo 10403S di Listeria monocytogenes (Bishop e Hinrichs, 1987) è stato coltivato in brodo Difco Brain-heart infusion (BHI) (BD Biosciences) contenente 50 μg/ml di streptomicina a 30 °C.