Stabilimento dell'infezione batterica nelle larve di Drosophila

In questo articolo

Abstract

Fonte: Hiroyasu, A., D et al., Estrazione di emociti dalle larve di Drosophila melanogaster per infezioni e analisi microbiche. J. Vis. Esp. (2018)

Questo video mostra la procedura per stabilire un'infezione batterica nelle larve di Drosophila inserendole in una goccia batterica e pungendola con un ago di tungsteno. Le larve vengono poi incubate su una piastra agar scanalata e ricca di nutrienti per studiare le interazioni ospite-patogeno.

Protocollo

1. Infezione in vivo

Riscalda il piatto di agar di succo di frutta Drosophila a temperatura ambiente per 15 minuti.
1. Aggiungi 30 g di agar a 700 mL d'acqua e autoclava per 40 minuti.
2. Sciogliere 0,5 g di parabene metilico in 10 mL di etanolo assoluto.
3. Aggiungi la soluzione di paraben di metile a 300 mL di concentrato di succo di frutta.
4. Mescola rapidamente il concentrato di succo nella soluzione di agar autoclavato e distribuisci 5 mL in piastre di Petri da 10 × 35 mm.
5. Dopo che i piatti si sono raffreddati per 15 minuti, conservali a 4 °C.
Prepara le larve di terzo stadio.
Metti la pasta di lievito su una piastra di agaro. Effettuare un taglio sottile nella piastra di agar dove le larve possono migrare per evitare l'asciugatura (Figura 1A). Assemblare un ago di tungsteno appuntito da 0,001 mm con pinze di fissaggio usando pellicola di paraffina (Figura 1B, C).
Pipetta 50 μL di Coxiella burnetii espressora ad alto titolo mCherry (5,95×10⁹ GE/mL) sul film di paraffina sotto il microscopio stereo e posiziona le larve nella piscina di batteri.
Posizionare le larve nella piscina di batteri, pungerle con un ago di tungsteno (Figura 3D) e trasferirle su una piastra di agar (Figura 1E).
Trasferire il residuo del mezzo patogeno sulla piastra di agar e sigillare la lastra con una pellicola di paraffina.
Mantenere le larve sul piatto nell'aria umida fino al tempo desiderato dopo l'infezione (Figura 1F). In questo esperimento, larve infette da C. burnetii sono presenti sulla piastra per 24 ore.

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Risultati

Figura 1: Infezione in vivo. A) Piastre di succo di frutta di Drosophila e pasta di lievito vengono utilizzate per l'incubazione delle larve infette in vivo . I tagli vengono effettuati nella piastra di agar per...