Questo video illustra la produzione e la purificazione di particelle ricombinanti del virus dell'epatite B, consentendo preparazioni virali sicure e prive di replicazione per lo studio degli eventi iniziali dell'infezione e per applicazioni di screening ad alto rendimento di farmaci antivirali.
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Articolo metodologico
Produzione e purificazione di particelle ricombinanti del virus dell'epatite B
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⸱
31 agosto 2026
In questo articolo
Abstract
Protocollo
1. Produzione di HBV ricombinante (Hepatitis B Virus) che codifica per la proteina reporter
- Preparazione delle cellule HepG2
- Preparare il mezzo di coltura cellulare (DMEM modificato di Dulbecco (Dulbecco's modified Eagle's medium) integrato con 10% di siero fetale bovino (FBS), 100 U/ml di penicillina, 100 µg/ml di streptomicina e 100 U/ml di aminoacidi non essenziali).
- Piastrare 4 x 106 cellule HepG2 (carcinoma epatocellulare umano G2) in una piastra da 10 cm rivestita di collagene con 10 ml di mezzo di coltura il giorno prima della trasfezione. Incubare le cellule HepG2 a 37 °C in un incubatore umidificato con 5% di C....
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti | |
|---|---|---|---|---|
| Reagente per saggio Nano-Glo Luciferasi | Promega | N1110 | ||
| Soluzione mista Penicillina-Streptomicina | Nacalai tesque | 09367-34 | ||
| DMEM | Thermo Fisher Scientific | 11995065 | ||
| Piatto da 100 mm rivestito con collagene | Iwaki | 4020-010 | ||
| Reagente di trasfezione Lipofectamine 3000 | Thermo Fisher Scientific | L3000001 | ||
| Polietilene glicole (PEG) 6000 | Sigma-Aldrich | 81255 | ||
| Polietilene glicole (PEG) 8000 | Sigma-Aldrich | 89510 | ||
| NaCl | Nacalai tesque | 31319-45 | ||
| Soluzione di EDTA 0,5 mol/L | Nacalai tesque | 06894-14 | ||
| Tris-HCl | Nacalai tesque | 35434-21 | ||
| Millex-HP, filtro da 0,45 μm in polieter solfone | Merck Millipore | SLHP033RS | ||
| Dietilsolfossido (DMSO) | Sigma-Aldrich | D2650 | ||
| Piastra da 96 pozzetti rivestita con collagene | Corning | NO3585 | ||
| HepG2-NTCP1-myc-clone22 | - | - | ||
| pUC1.2HBV delta epsilon | - | - | ||
| pUC1.2HBV/NL | - | - |
