Questo video illustra l'uso di densovirus ricombinanti di zanzara che codificano per microRNA al fine di silenziare geni specifici nelle larve di zanzara. Le larve infette nel primo stadio producono microRNA funzionali che sopprimono l'espressione del gene bersaglio per studi successivi.
Articolo metodologico
Silenziamento genico mediato da densovirus ricombinante in larve di zanzara
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31 agosto 2026
In questo articolo
Abstract
Protocollo
1. Trasduzione nei zanzare
- Lavare 100 larve del primo stadio di Aedes albopictus tre volte con acqua deionizzata, quindi trasferire le larve in un becher contenente 95 mL di acqua deionizzata. Aggiungere 5 mL delle scorte di densovirus ricombinante di Aedes aegypti (rAaeDV) (concentrazione finale di 1,00 x 1010 copie/mL).
- Incubare per 24 h a 28 °C, lavare le larve tre volte con acqua deionizzata, quindi riportare le larve nelle piastre e nutrirle regolarmente.
- Monitorare il livello di espressione del gene bersaglio nelle larve mediante qPCR o Western blot.
NOTA: Il metodo di rilevamento del segnale fluorescente può essere utilizzato per isolare le larve infette in modo più preciso. Ad esempio, per rilevare i segnali fluorescenti provenienti da larve infettate con un virus ricombinante che esprime DsRed, le larve possono essere posizionate su un vetrino a cavità e osservate al microscopio a fluorescenza invertito ogni 8 h fino a 2 giorni post-infezione. Una volta rilevate le larve fluorescenti, queste devono essere separate in singoli bicchierini di plastica per consentire un'osservazione continua successiva. Larve con tessuti multipli infetti possono essere identificate mediante questo metodo.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Centrifuga | Thermo Scientific | 75004260 | |
| Sistema di centrifugazione | Beckman Coulter | 363118 | |
| SuperReal PreMix Plus (SYBR Green) | Beijing Tiangen Biotech | FP205 |
