Visualizzazione delle nanoparticelle del virus dell'epatite E tramite microscopia elettronica a trasmissione

Abstract

Fonte: Chen, C. C., et al. Funzionalizzazione della Superficie di Nanoparticelle del Virus dell'Epatite E Mediante Metodi di Coniugazione Chimica. J. Vis. Exp. (2018)

Questo video illustra la preparazione e la colorazione negativa di nanoparticelle simili al virus dell'epatite E per la visualizzazione mediante microscopia elettronica a trasmissione. Il metodo mette in evidenza l'integrità strutturale delle particelle costituite esclusivamente da capside autoassemblato, confermandone l'uniformità e la purezza tramite imaging ad alta risoluzione.

Protocollo

1. Osservazione delle nanoparticelle del virus dell'epatite E (HEVNPs) mediante microscopio elettronico a trasmissione (TEM)
   1. Preparare o diluire i campioni di HEVNP a 0,5 - 2 mg/mL con acido 2-(N-morfolin)etansolfonico (MES) 10 mM, pH 6,2, per l'analisi al TEM.
   2. Ionizzare le griglie rivestite di carbonio mediante scarica al plasma a 40 mA per 30 s per ottenere una superficie di carbonio idrofila. L'equipaggiamento per la scarica al plasma è descritto nella Tabella dei Materiali.
      NOTA: La superficie di carbonio idrofila delle griglie rimane stabile solo per 30 minuti dopo il trattamento con scarica al plasma.
   3. Trattenere la griglia con pinzette e aggiungere 2 µL di campione di HEVNP sulla griglia, attendere 15 - 30 s, quindi asciugare con carta da filtro.
   4. Lavare immediatamente la griglia con ddH₂0 e asciugare con carta da filtro.
   5. Aggiungere immediatamente 2 µL di acetato di uranile al 2% sulla griglia, attendere 15 s, quindi asciugare con carta da filtro. Asciugare le griglie campione ponendole in un armadio elettronico disidratante per tutta la notte.
   6. Trasferire la griglia nel TEM e acquisire immagini con un ingrandimento compreso tra 10.000x e 80.000x. Le HEVNPs appaiono al TEM come proteine icosaedriche vuote con un diametro di circa 27 nm, a causa dell'assenza di RNA virale.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
MES idrato	Sigma-Aldrich Chemical Co	M8250-250G	MES
EMS Glow Discharger	Electron Microscopy Science		ionizzatore al plasma