Questo video mostra la procedura per isolare il cervello tutto da adulto Drosophila, in preparazione per la registrazione di singoli neuroni utilizzando tecnologia standard a cellula intera. Esso comprende le immagini di cellule GFP etichettati e neuroni visualizzati durante la registrazione.
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Articolo metodologico
Registrazioni cella intero cervello di adulti Drosophila
In questo articolo
Sommario
Abstract
In questo video, dimostriamo la procedura per isolare il cervello tutto da adulto Drosophila, in preparazione per la registrazione da singoli neuroni. Cominciamo con la descrizione della soluzione di dissezione e la cattura delle femmine adulte utilizzate nei nostri studi. La procedura per la rimozione del cervello intatto, tra cui entrambi i lobi ottici, è illustrata. Dissezione della trachea sovrastante è anche mostrato. Il cervello isolato non è solo piccola ma necessita di particolare attenzione nella gestione in questa fase, per evitare di danneggiare i neuroni, molti dei quali sono vicini alla superficie esterna del tessuto. Si mostra come un supporto speciale che abbiamo sviluppato è usato per stabilizzare il cervello nella camera di registrazione. Un elettrofisiologia norme stabilite viene utilizzato per la registrazione di singoli neuroni o coppie di neuroni. Una immagine fluorescente, vista attraverso il microscopio di registrazione, da una linea guida GAL4 espressione GFP (GH146) illustra come i neuroni di proiezione (PN) sono identificate nel cervello vivo. Una immagine ad alta potenza Nomarski mostra una vista di un singolo neurone che è nel mirino per la registrazione a cellula intera. Quando il cervello è rimosso con successo senza danni, la maggior parte dei neuroni sono attivi spontaneamente, sparando potenziali d'azione e / o esporre spontaneo di input sinaptici. Questo in preparazione in situ, in cui la registrazione a cellule intere di neuroni identificati in tutto il cervello può essere combinato con manipolazioni genetiche e farmacologiche, è un modello utile per esplorare la fisiologia cellulare e la plasticità del sistema nervoso centrale adulto.
Protocollo
I. La dissezione del cervello da mosca adulta
- Mettere una piccola goccia (~ 100 l) di dissezione soluzione in centro di un piatto 35 millimetri Petri.
- Cattura femmina adulta con aspiratore. Sotto dissezione microscopio, utilizzare due aghi da siringa di decapitare la mosca.
- Mettere la testa in una piccola goccia di soluzione salina dissezione (con papaina aggiunto) in una capsula di Petri.
- Testa di posizione con con proboscide rivolta fondo del piatto.
- Tenere la cuticola che copre l'occhio sinistro composto con ago 1. Fare un taglio diagonale che si estende dalla dorsale verso la superficie ventrale con ago 2, pro....
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Discussione
La preparazione isolato intero cervello illustriamo in questo video permette la valutazione dei meccanismi cellulari alla base eccitabilità e la trasmissione sinaptica nei neuroni identificati, compresi quelli nelle vie di elaborazione olfattiva, nel cervello adulto Drosophila (Gu e O Dowd, 2006). Questo approccio è complementare allo studio dell'attività neuronale nel cervello degli adulti Drosophila intatto (Wilson et all 2004), più o meno allo stesso modo le registrazioni da parte dei neuroni in una fetta cervello dei mammiferi sono .......
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Ringraziamenti
Questo lavoro è stato finanziato da una sovvenzione al NIH NS27501 DKOD. Supporto aggiuntivo per questo lavoro è stato fornito da una sovvenzione HHMI Programma Professore a DKOD.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti | |
|---|---|---|---|---|
| #5 Pinza | Strumento | Fine Science Tools | n. 11251-10 | Fare attenzione a non danneggiare mai le punte sottili della pinzetta |
| Papaina | Reagente | Worthington Biochemical | 3126 | 20 U/ml attivata da 1 mM L-cisteina |
| Microscopio stereoscopico | Modello SMZ-2B: C-PS | Nikon Instruments | Dotato di luci a fibra ottica con collo d'oca posizionate a basso angolo | |
| Ago &e siringa | PrecisionGlide®?, Becton Dickinson & Co | 305175 & 309602 | Economico e duraturo | |
| Microscopio eretto | Axioskop2 FS plus | Carl Zeiss, Inc. | Dotato di una piastra fissa, obiettivo ad immersione in acqua 40X, ottiche Nomarski e lampada a fluorescenza | |
| Amplificatore per tecnica del patch clamp | 200 B | Molecular Devices | ||
| Convertitore D-A Digidata | 1322A | Molecular Devices |
Riferimenti
- Gu, H., O Dowd, D. K., K, D. Cholinergic synaptic transmission in Adult Drosophila Kenyon cells in situ. Journal of Neuroscience. 26, 265-272 (2006).
- Wilson, R. I., Turner, G. C., Laurent, G. Transformation of olfactory representations in the Drosophila antennal....
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Ristampe e permessi
