L'applicabilità del test clonogenica per valutare la vitalità riproduttiva è stata stabilita da oltre 50 anni. Qui mostriamo la procedura generale per l'esecuzione del test clonogenica con cellule aderenti.
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| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti | |
|---|---|---|---|---|
| Terreno libero da siero cheratinociti | Terreno di crescita | Invitrogen | 17005042 | Integrato con 2mM di L-glutammina, 20μ g/ml di gentamicina, fattore di crescita epidermico, estratto di ipofisi bovina. |
| Tripsina-EDTA | Invitrogen | 15400-054 | 0,05% tripsina / EDTA per staccare le cellule aderenti; 10 x stock diluito in PBS senza Ca2+/Mg2+. | |
| Dulbecco' s terreno essenziale modificato | Terreno di crescita | Invitrogen | 11885-084 | Integrato con il 10% di FBS e 20μ g/ml di gentamicina; utilizzato per neutralizzare la tripsina/EDTA. |
| Soluzione | salina allo 0,09% | Utilizzata per lavare le colonie. | ||
| Soluzione di formalina tamponata neutra al 10% | Sigma-Aldrich | HT501128 | ~4% formaldeide; utilizzata per fissare le colonie. | |
| Polvere di cristallovioletto | SPI Fornisce | 02577-MB | 0,01% soluzione di cristallovioletto, preparata in dH2O, utilizzata per colorare le colonie. | |
| d'élite Gammacell 1000 | Nordion International Inc. | |||
| piastre di Petri | 60 x 15 mm | Falcon BD | 353002 | |
| Emocitometro | Hawksley; Scatola | |||
| Scatola di plastica con fori praticati ai lati opposti del coperchio; per la conservazione di piastre di Petri durante l'incubazione prolungata per la formazione di colonie. | ||||
| Stereomicroscopio | Tipo 102 | Strumenti Nikon | Utilizzato per contare colonie costituite da > 50 celle. |
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