Una dimostrazione della fabbricazione e l'uso di un elettrodo extracellulare di aspirazione utilizzata per misurare le registrazioni elettrofisiologiche delle corde roditori neonatale vertebrale In vitro
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Articolo metodologico
Spinal Cord Elettrofisiologia II: extracellulare fabbricazione di elettrodi di aspirazione
In questo articolo
Sommario
Abstract
Sviluppo della circuiteria neurale e locomozione possono essere studiate usando neonatale roditori midollo spinale centrale pattern generator (CPG) comportamento. Dimostriamo un metodo per fabbricare elettrodi di aspirazione che sono utilizzati per esaminare l'attività CPG, o locomozione fittizia, in cordoni roditori sezionato spinale. I cavi roditori spinale sono posti in artificiale liquido cerebrospinale e le radici ventrali sono trascinati nella elettrodo di aspirazione. L'elettrodo è costruito modificando un elettrodo di aspirazione disponibile in commercio. Un filo d'argento pesante viene usato al posto del filo standard assegnato da l'elettrodo disponibili in commercio. La punta di vetro sull'elettrodo commerciale viene sostituito con una punta di plastica per una maggiore durata. Prepariamo mano elettrodi disegnate e elettrodi in dimensioni specifiche di tubi, permettendo coerenza e riproducibilità. I dati vengono raccolti con un amplificatore e acquisizione di software neurogram. Le registrazioni vengono effettuate su un tavolo d'aria all'interno di una gabbia di Faraday per evitare interferenze meccaniche ed elettriche, rispettivamente.
Protocollo
Le registrazioni elettrofisiologiche di isolati midollo spinale può rivelare cambiamenti genetici e di sviluppo di circuiti neurali 1. Abbiamo già dimostrato un metodo per analizzare i cavi del mouse neonatale vertebrale 2. Qui vi presentiamo un metodo per preparare elettrodi aspirazione utile nella registrazione locomozione fittizia nel midollo spinale isolato 3.
La punta di un elettrodo di tubi di plastica può essere attratto da una punta molto sottile a mano utilizzando una lampada a bassa temperatura alcool 3-5. Il tubo di plastica (PE90, Clay Adams Intramedic TM) si tiene sopra l....
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Discussione
Sviluppo del sistema nervoso possono essere studiate usando cavi isolati spinale di roditori. In presenza di neurotrasmettitori, locomozione fittizia possono essere generati dal midollo spinale sotto forma di attività elettrica fantasia 1,3. Queste esplosioni ritmiche sono prodotti a 0,2-0,5 Hz e sono modellati in alternanza destra-sinistra e flessori-estensori. A diversi stadi di sviluppo, la robustezza ed i modelli di questa attività varia a 1. Mutazioni genetiche possono anche disturbare il mode.......
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Dichiarazioni
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Ringraziamenti
Samuel L. Pfaff è docente nei Laboratori di espressione genica presso il Salk Institute for Biological Studies e un investigatore della Howard Hughes Medical Institute. Questo lavoro è stato sostenuto dal Christopher e Dana Reeve Foundation. Joe Belcovson, Kent Schnoeker e Mike Sullivan in Risorse Multimediale presso il Salk Institute ha fornito assistenza con la fotografia e montaggio.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Tubazione in PTFE Sub Lite Wall (piccola tubazione) | Zeus | 36AWG | 0,005” ID x 0,003” spessore parete (parti piccole). Disponibile anche da 0,003” a 0,006” |
| Grande tubazione (0,86 mm (0,34”)) | BD Biosciences | 427420 | 0,86 mm (0,34”) O.D. 1,27 mm (0,050”) |
| Corpo dell'elettrodo | A-M Systems | 573000 | |
| Adesivo | JB Weld | ||
| Adesivo: sigillante al silicone | |||
| Stagno e saldatore | |||
| Candeggina | |||
| Xilene | |||
| Filo d'argento: 0,010” | A-M Systems | ||
| Puntine per insetti: Austerlitz 0,1 mm | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| Supporto magnetico | Narishige International | GJ-8 | |
| Micromanipolatore | Narishige International | MN 151 | |
| Minischeda (testa di lettura) | Grass Technologies | F-15EB/B1 | |
| Unità adattatrice Polyview | Grass Technologies | PVA 8 | |
| Sistema amplificatore fisiologico portatile bipolare | Grass Technologies | 15LT | |
| SCHEDA ANALOGICO-DIGITALE | National Instruments | 6035E | |
| Tavolo antivibrazioni; Vibraplane | Kinetic Systems |
Riferimenti
- Gallarda, B. W., Sharpee, T. O., Pfaff, S. L., Alaynick, W. A. Defining rhythmic locomotor burst patterns using a continuous wavelet transform. Ann N Y Acad Sci. 1198, 133-139 (2010).
- Meyer, A., Gallarda, B. W., Pfaff, S., Alaynick, W. Spinal cord electrophysiology. J Vis Exp. , (2010).
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Ristampe e permessi
