Legatura del cieco procedura di puntura

Sommario

Il modello murino di legatura del cieco e la puntura come un prezioso strumento per lo studio della sepsi umana.

Abstract

Sepsi umana è caratterizzata da una serie di reazioni sistemiche in risposta alle infezioni intensiva e massiccia che non è riuscito a essere contenuta a livello locale da parte dell'ospite. Attualmente, si colloca sepsi tra le prime dieci cause di mortalità nelle unità di terapia intensiva Stati Uniti ^1. Durante la sepsi ci sono due fasi stabilito emodinamico, che potrebbero sovrapporsi. La fase iniziale (iperdinamica) è definita come una massiccia produzione di citochine proinfiammatorie e le specie reattive dell'ossigeno da parte dei macrofagi e neutrofili che colpisce la permeabilità vascolare (porta a ipotensione), la funzione cardiaca e induce cambiamenti metabolici si conclude con necrosi dei tessuti e insufficienza d'organo. Di conseguenza, la causa più comune di mortalità è danno renale acuto. La seconda fase (hypodynamic) è un anti-infiammatorio processo che coinvolge alterato dei monociti presentazione dell'antigene, diminuzione della proliferazione dei linfociti e la funzione e l'apoptosi aumentata. Questo stato conosciuto come l'immunosoppressione o la depressione immunitaria aumenta nettamente il rischio di infezioni nocosomial e, in definitiva, la morte. I meccanismi di questi processi fisiopatologici non sono ben caratterizzati. Poiché entrambe le fasi di sepsi può causare danni irreversibili e irreparabili, è essenziale per determinare lo stato immunologico e fisiologica del paziente. Questo è il motivo principale per cui molti farmaci terapeutici hanno fallito. Lo stesso farmaco dato a diversi stadi di sepsi può essere terapeutico o comunque nocivi o non hanno alcun effetto ^2,3. Per capire sepsi a vari livelli è fondamentale avere un modello animale adeguato e completo che riproduce il decorso clinico della malattia. E 'importante per caratterizzare i meccanismi fisiopatologici che si verificano durante la sepsi e controllare le condizioni di modello per testare potenziali agenti terapeutici.

Per studiare l'eziologia della sepsi umana ricercatori hanno sviluppato diversi modelli animali. Il modello più diffuso clinica è la legatura del cieco e foratura (CLP). Il modello CLP consiste nella perforazione del cieco che permette il rilascio di materiale fecale nella cavità peritoneale di generare una risposta immunitaria indotta esacerbato da infezione polimicrobica. Questo modello soddisfa la condizione umana che è clinicamente rilevante. Come negli esseri umani, i topi sottoposti a CLP con fluidi mostrano il primo (inizio) di fase iperdinamico che nel tempo avanza al secondo (in ritardo) fase hypodynamic. Inoltre, il profilo delle citochine è simile a quello osservato nella sepsi umana, dove vi è una maggiore apoptosi dei linfociti (recensione a ^4,5). Grazie ai meccanismi molteplici e sovrapposte coinvolti nella sepsi, i ricercatori hanno bisogno di un modello adatto sepsi di gravità controllati al fine di ottenere risultati coerenti e riproducibili.

Protocollo

1. Legatura del cieco e la puntura come un modello murino di sepsi umani

Per questa procedura C57BL / 6 topi (7-9 settimane) sono utilizzati.

1. Anestetizzare il topo mediante iniezione intraperitoneale di una soluzione di 1:1 ketamina (75mg/kg) e xilazina (15mg/kg). Come riferimento, iniettare 30 ml di soluzione 1:01 in un topo peso di 20 grammi. In alternativa, i topi possono essere anestetizzati con isoflurano inalato utilizzando un vaporizzatore anestetico.
2. Shave l'addome del mouse e disinfettare zona da prima soluzione di betadine applicando seguita strofinando con un tampone imbevuto di alcool al 70% (numero 1 nell....

Discussione

Qui vi mostriamo nel dettaglio come eseguire il modello CLP nei topi e modulare il grado di gravità.

Rispetto ad altri modelli animali di sepsi, CLP può essere eseguita in qualsiasi ceppo di topi di differenti età e sesso. Si tratta di una procedura relativamente semplice e poco costoso intervento chirurgico. In questo modello, il grado di gravità ha un impatto diretto sulla percentuale di sopravvivenza. La lunghezza della legatura, lo spessore dell'ago e il numero di punture sono parame.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Nome del reagente	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Ketamina	Ketaset	0856-2013-01
Xylazina	AnaSed	NADA # 139-236
Siringa di insulina 29G	Exel	26028
Sutura di seta, 6-0 prolene	Ethicon	8680G
Aghi 19G e 25G	BD	305186
Rasoio	Generale di alimentazione	Generale di alimentazione
Riscaldamento lampada a raggi infrarossi	Generale di alimentazione	Generale di alimentazione
Michel ferita clip 7 millimetri	Roboz chirurgica Instr	RS-9270
Ear Loop Maschera	Fisher Scientific	19-130-4181
Dissezione forbici	Roboz chirurgica Instr	RS-6702
Betadine soluzione	VWR	63410-992
Pinze chirurgiche	Roboz chirurgica Instr	RS-5135
70% tampone imbevuto di alcool isopropilico	Fisher Scientific	22-031-350
Buprenorfina	Bedford Labs	55390-100-10
Tramadol	Sigma-Aldrich	42965