Saggio di spin down dell'agarosio: una tecnica per incorporare organoidi per l'analisi istologica

Abstract

Fonte: Lee, S. et al. Istituzione e analisi di organoidi tridimensionali (3D) derivati da campioni di metastasi ossee di cancro alla prostata di pazienti e loro xenotrapianti. J. Vis. Exp. (2020)

In questo video, eseguiamo un test spin-down per incorporare organoidi 3D per il cancro alla prostata nell'agarosio. Questi organoidi incorporati possono essere utilizzati per ulteriori analisi istopatologiche per studiare la crescita e lo sviluppo del cancro.

Protocollo

1. Elaborazione di organoidi per istologia: il metodo di spin down dell'agarosio

NOTA: Questo protocollo è adattato da una precedente pubblicazione di Vlachogiannis et al. Abbiamo aggiunto una fase che coinvolge l'inclusione dell'agarosio per incorporare con successo tutte le popolazioni di organoidi.

1. Rimuovere il supporto esistente dal pozzo. Fare attenzione a non aspirare le cupole della membrana del seminterrato.
2. Aggiungere un volume uguale (uguale al volume del terreno rimosso dalla fase 1) di soluzione di recupero cellulare e incubare per 60 minuti a 4 °C.
3. Smuov....

Risultati

Figura 1: Un passaggio chiave per il successo dell'inclusione dell'agarosio. Un processo per staccare il pellet cellulare dalla parete della provetta da 1,5 mL.

....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
1 ml di Pipettman	Gilson	F123602
Siringa da 1 ml	Siringa BD	329654
Provetta da 1,5 mL	Prodotti Spectrum Lab	941-11326-ATP083
Ago da 25 G	Ago BD PrecisionGlide	305122
4% Paraformaldeide (PFA)	Alfa Aesar	J61899
70% Etanolo (EtOH)	VWR	BDH1164-4LP
agarosio	Lonza	50000
Piastra per colture cellulari - 24 pozzetti	Costar	Telefono 3524
Piastra per colture cellulari - 48 pozzetti	Costar	Codice: 3548
Piastra per colture cellulari - 6 pozzetti	Costar	3516
Soluzione di dissociazione cellulare, Accumax	Tecnologie cellulari innovative, Inc.	AM105
Soluzione per il recupero delle cellule	Corning	354253
Raschietto cellulare	Sarstedt	83,18
dPBS	Corning/Cellgro	21-031-CV
Puntali per pipette da 1 mL (puntali blu)	Fisherbrand Redi-Tip	21-197-85
Centrifuga da tavolo piccola	ThermoFisher Scientifico	75002426
Composto OCT	Tessuto-Tek	4583
Bagno d'acqua	Fisher Sc	Codice: 2320