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Tutte le procedure che coinvolgono gli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria di JoVE.
1. La dissezione del sistema urogenitale (UGS)
NOTA: Lo schema è presentato nella Figura 1.
- Eutanasia di un topo maschio C57BL/6 di 3 mesi utilizzando il metodo dell'eutanasia inalatoria di CO2 o un'altra tecnica approvata.
nota: I topi di età compresa tra 3 e 12 mesi possono essere utilizzati con successo per l'esperimento. I topi più anziani (> 6 mesi) avranno molto probabilmente più grasso intorno all'UGS, che dovrà essere eliminato. L'identificazione e la separazione dei lobi è spesso difficile nei topi di età inferiore ai 3 mesi. Per l'esperimento possono essere utilizzate anche altre varietà.
- Posiziona il mouse sulla schiena e fissa le zampe con degli spilli in modo che il lato ventrale dell'animale sia esposto.
- Spruzzare etanolo al 70% sull'addome del topo e pulirlo.
nota: Non è necessario radere i peli dell'addome prima della dissezione.
- Solleva la pelle dall'addome, insieme allo strato muscolare, con un paio di pinze smussate medie e fai un'incisione a forma di Y rovesciata sull'addome usando le forbici.
- Per prima cosa, fai un'incisione diritta con un paio di forbici affilate da appena sopra il pene fino allo sterno (Figura 2a).
- Tagliare dalla base dell'incisione verso ogni dito, fino alle cosce (Figura 2b). Piegare la pelle su entrambi i lati e nella parte inferiore per visualizzare l'intera area addominale (Figura 2c-e).
nota: La dimensione del taglio varia a seconda dell'età e delle dimensioni del topo. La dimensione dell'incisione diritta iniziale può variare da 1,5 a 4 cm, a seconda delle dimensioni del topo.
- Spostati sugli altri organi per esporre l'UGS. Sollevare e muovere gli intestini giallo-marroni (Figura 2f). Raccogliere i cuscinetti adiposi addominali (il tessuto spugnoso bianco opaco) con una pinza e spostarli ai lati (Figura 2g).
nota: L'UGS comprende le vescicole seminali, l'uretra, la prostata, il dotto deferente (dotto deferente) e la vescica urinaria. Può essere identificato dalla caratteristica coppia di archi semicircolari bianchi opachi (che sono le vescicole seminali), con la sacca vescicale piena di liquido attaccata alla base. Il tessuto traslucido situato proprio sotto le vescicole seminali è la prostata.
- Individuare l'UGS, tenere saldamente la vescica urinaria con una pinza smussata e sollevare l'intero UGS verso l'alto dall'addome del topo.
nota: Se la vescica è piena, scolarla prima con una siringa piccola per fornire una migliore presa con la pinza e ridurre il rischio di rottura della vescica.
- Continuando a tirare verso l'alto la vescica, fai scorrere un paio di forbici sotto la vescica e la prostata fino alla colonna vertebrale e fai un taglio. Tagliare le connessioni rimanenti alla cavità addominale (Figura 2h e 2i). Fare attenzione a non tagliare troppo vicino all'UGS per evitare di tagliare accidentalmente il tessuto prostatico.
nota: Durante l'esecuzione del taglio sotto l'UGS, le forbici devono essere inserite fino alla parte posteriore del mouse, in modo che il taglio scatti anche la colonna vertebrale. Questo metodo si traduce nel recidere quasi tutte le connessioni tra l'UGS e la cavità addominale in un solo taglio, riducendo il tempo necessario per estrarre il tessuto dal topo.
- Rimuovere l'UGS e metterlo in 2-6 mL (sufficienti a coprire il tessuto) di soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) o il terreno Eagle modificato di Dulbecco (DMEM, glucosio alto) in una piastra di Petri da 6 cm (Figura 2j e 2k) e spostarlo in un microscopio da dissezione (ingrandimento 10X).
nota: Sostituire il mezzo di dissezione come richiesto nei passaggi rimanenti.
