Campionamento di singole cellule mediante micromanipolazione: una tecnica per isolare singole cellule dalla sospensione di cellule tumorali

Abstract

Fonte: Chen S. et al. Pre-arricchimento delle cellule bersaglio e amplificazione dell'intero genoma per la caratterizzazione a valle di singole cellule. J. Vis. Exp. (2018)

Questo video descrive la tecnica per isolare singole cellule da un pool di cellule bersaglio per eseguire analisi a valle. In questo metodo, un micromanipolatore montato su un microscopio viene utilizzato per l'isolamento ad alta precisione di una singola cellula bersaglio.

Protocol

1. Campionamento a cella singola

1. Micromanipolazione
   NOTA: Per consentire applicazioni a valle come l'analisi dell'intero genoma (WGA), singole cellule isolate verranno aggiunte a 2 μL di master mix di lisi cellulare. Preparare una master mix in base al numero di celle da lavorare. Calcolare i volumi extra per la perdita dovuta al pipettaggio e posizionare la miscela master di lisi cellulare sul ghiaccio.
   1. Preparare la miscela master di lisi cellulare (componenti del kit WGA, tabella dei materiali e dei reagenti). In breve, miscelare 2,0 μL di tampone di reazione, 1,3 μL d....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Soluzione salina tamponata con fosfato (1x PBS)	Thermo Fisher Scientifico	Codice 10010-015
Provette Vacutainer EDTA (o Na-eparina)	Bd	366450 (o 366480)	Utilizzato come provetta di reazione per la cattura ex vivo di cellule bersaglio
Pipette Pasteur 150 mm	Vulcano	D810	Utilizzato per l'applicazione a basso volume di celle al C&R
Penna per grasso	Dako	Episodio 2002	Utilizzato su vetrini per mantenere in posizione la sospensione delle celle
Axiovert M200 equipaggiato con Mikromanipulator MMJ e CellTram vario	Zeiss/Eppendorf		Usa la micromanipolazione a portata di mano
Microcapillari (25 μm di diametro), CustomTip Tipo I	Eppendorf	930001201	Utilizzato per la micromanipolazione delle cellule
Provette per PCR da 0,2 mL	Biozima	Codice 710920