Xenotrapianto tumorale della capsula renale: una tecnica per generare un modello animale sperimentale per valutare la carcinogenesi della prostata

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Procedura chirurgica: xenotrapianto di capsula renale

1. Prima dell'induzione dell'anestesia, osservare il topo per garantire la salute e il benessere.
2. Posizionare il topo nella camera per l'induzione dell'anestesia con isoflurano al 3-5%. Quando l'animale ha smesso di muoversi e la frequenza respiratoria è diminuita, trasferirsi sul cono del naso in posizione prona e mantenere l'anestesia all'1-3%.
3. Se necessario, utilizzare un tagliaunghie per radere la parte posteriore del mouse. Questo non è necessario quando si utilizzano topi nudi atimici (nu/nu).
4. Applicare una pressione decisa sulla fettuccia del retropiede esteso per valutare l'adeguatezza dell'anestesia. Se il topo risponde alla pressione, è necessario più tempo affinché l'anestesia faccia effetto. Se necessario, regolare leggermente il flusso dell'anestesia per ottenere un'anestesia adeguata.
5. Quando il topo è adeguatamente anestetizzato, disinfettare il sito chirurgico con una soluzione di iodio chirurgico (Betadine) seguita da alcol al 70%.
6. Indossare guanti e camici sterili; applicare teli sterili sul sito chirurgico. Solleva la pelle della schiena con un paio di pinze dentate e, usando le forbici grossolane, fai un'incisione della linea mediana dorsale di 2-3 cm.
7. Utilizzando forbici smussate o una sonda, separare il derma sottostante dalla parete corporea (su entrambi i lati dell'incisione per l'innesto bilaterale o su un lato per l'innesto unilaterale).
8. Riposizionare il mouse in posizione laterale e identificare la posizione del rene visualizzando il profilo renale attraverso la parete muscolare. L'applicazione di una leggera pressione manuale con il pollice e l'indice sull'addome può aiutare a visualizzare gli organi interni.
9. Usando le forbici dell'iride sottili e facendo attenzione a evitare i vasi principali e i nervi spinali, praticare un'incisione di 1 cm nella parete del corpo parallela alla colonna vertebrale. Allargare questa incisione a 1,5-2,0 cm (leggermente più lunga dell'asse lungo del rene) aprendo delicatamente le forbici dopo averle inserite nell'incisione iniziale.
10. Esteriorizzare il rene applicando una leggera pressione all'esterno della parete muscolare su entrambi i lati del rene usando l'indice e il pollice. Infilare i bordi della pelle sotto il rene esteriorizzato, che poggerà sulla parete del corpo. Mentre il rene è esteriorizzato, mantenere l'idratazione della capsula renale applicando soluzione fisiologica sterile.
11. Usando una pinza fine #5, sollevare delicatamente la capsula renale dal parenchima del rene e, con un bisturi sottile, praticare un'incisione di 2-4 mm nella capsula. La dimensione dell'incisione è determinata dalla dimensione dell'innesto, ma deve essere ridotta al minimo per mantenere l'integrità della capsula.
12. Manipolare una pipetta di vetro Pasteur che è stata disegnata sottile e lucidata a fuoco con un'estremità chiusa arrotondata sotto la capsula tangente alla superficie del rene. Aprire delicatamente una piccola tasca per la capsula per gli innesti, facendo molta attenzione a non danneggiare il parenchima renale.
13. Il bordo tagliato della capsula renale viene sollevato con la pinza fine e l'innesto viene inserito nella tasca sotto la capsula utilizzando la pipetta di vetro lucidato a fuoco. Diversi innesti possono essere posizionati sotto la capsula renale e distanziati uniformemente sulla superficie del rene.
14. Se durante il corso dell'innesto la capsula si disidrata, deve essere inumidita applicando soluzione fisiologica sterile.
15. Al termine dell'innesto, sollevare delicatamente i lati dell'incisione della parete muscolare per riposizionare il rene nella cavità corporea. Osservare che gli innesti non scivolino fuori da sotto la capsula.
16. Chiudere la parete muscolare con una singola sutura (4-0, sutura vicryl FS-2). La procedura chirurgica può essere ripetuta sul rene controlaterale riposizionando il mouse.
17. Utilizzando una pinza dentata, allineare i bordi dell'incisione cutanea e applicare 2-3 clip per ferite chirurgiche per chiudere l'incisione. Somministrare l'analgesia (usiamo 5-10 mg/kg di carprofene utilizzando un'iniezione sottocutanea) e posizionare il topo in posizione sdraiata laterale nella gabbia di recupero. Garantire il mantenimento della temperatura corporea con il calore di una lampada o di un termoforo. Osservare il completo recupero del mouse, che dovrebbe avvenire in meno di 15 minuti.
18. I topi devono essere osservati per le successive 24 ore per segni di dolore post-operatorio, sanguinamento e/o altre complicanze. Ispezionare regolarmente le incisioni chirurgiche per segni di infezione.
19. Rimuovere le clip della ferita con il dispositivo di rimozione chirurgica della clip della ferita 7-14 giorni dopo l'intervento.