Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Procedura chirurgica: xenotrapianto di capsula renale
- Prima dell'induzione dell'anestesia, osservare il topo per garantire la salute e il benessere.
- Posizionare il topo nella camera per l'induzione dell'anestesia con isoflurano al 3-5%. Quando l'animale ha smesso di muoversi e la frequenza respiratoria è diminuita, trasferirsi sul cono del naso in posizione prona e mantenere l'anestesia all'1-3%.
- Se necessario, utilizzare un tagliaunghie per radere la parte posteriore del mouse. Questo non è necessario quando si utilizzano topi nudi atimici (nu/nu).
- Applicare una pressione decisa sulla fettuccia del retropiede esteso per valutare l'adeguatezza dell'anestesia. Se il topo risponde alla pressione, è necessario più tempo affinché l'anestesia faccia effetto. Se necessario, regolare leggermente il flusso dell'anestesia per ottenere un'anestesia adeguata.
- Quando il topo è adeguatamente anestetizzato, disinfettare il sito chirurgico con una soluzione di iodio chirurgico (Betadine) seguita da alcol al 70%.
- Indossare guanti e camici sterili; applicare teli sterili sul sito chirurgico. Solleva la pelle della schiena con un paio di pinze dentate e, usando le forbici grossolane, fai un'incisione della linea mediana dorsale di 2-3 cm.
- Utilizzando forbici smussate o una sonda, separare il derma sottostante dalla parete corporea (su entrambi i lati dell'incisione per l'innesto bilaterale o su un lato per l'innesto unilaterale).
- Riposizionare il mouse in posizione laterale e identificare la posizione del rene visualizzando il profilo renale attraverso la parete muscolare. L'applicazione di una leggera pressione manuale con il pollice e l'indice sull'addome può aiutare a visualizzare gli organi interni.
- Usando le forbici dell'iride sottili e facendo attenzione a evitare i vasi principali e i nervi spinali, praticare un'incisione di 1 cm nella parete del corpo parallela alla colonna vertebrale. Allargare questa incisione a 1,5-2,0 cm (leggermente più lunga dell'asse lungo del rene) aprendo delicatamente le forbici dopo averle inserite nell'incisione iniziale.
- Esteriorizzare il rene applicando una leggera pressione all'esterno della parete muscolare su entrambi i lati del rene usando l'indice e il pollice. Infilare i bordi della pelle sotto il rene esteriorizzato, che poggerà sulla parete del corpo. Mentre il rene è esteriorizzato, mantenere l'idratazione della capsula renale applicando soluzione fisiologica sterile.
- Usando una pinza fine #5, sollevare delicatamente la capsula renale dal parenchima del rene e, con un bisturi sottile, praticare un'incisione di 2-4 mm nella capsula. La dimensione dell'incisione è determinata dalla dimensione dell'innesto, ma deve essere ridotta al minimo per mantenere l'integrità della capsula.
- Manipolare una pipetta di vetro Pasteur che è stata disegnata sottile e lucidata a fuoco con un'estremità chiusa arrotondata sotto la capsula tangente alla superficie del rene. Aprire delicatamente una piccola tasca per la capsula per gli innesti, facendo molta attenzione a non danneggiare il parenchima renale.
- Il bordo tagliato della capsula renale viene sollevato con la pinza fine e l'innesto viene inserito nella tasca sotto la capsula utilizzando la pipetta di vetro lucidato a fuoco. Diversi innesti possono essere posizionati sotto la capsula renale e distanziati uniformemente sulla superficie del rene.
- Se durante il corso dell'innesto la capsula si disidrata, deve essere inumidita applicando soluzione fisiologica sterile.
- Al termine dell'innesto, sollevare delicatamente i lati dell'incisione della parete muscolare per riposizionare il rene nella cavità corporea. Osservare che gli innesti non scivolino fuori da sotto la capsula.
- Chiudere la parete muscolare con una singola sutura (4-0, sutura vicryl FS-2). La procedura chirurgica può essere ripetuta sul rene controlaterale riposizionando il mouse.
- Utilizzando una pinza dentata, allineare i bordi dell'incisione cutanea e applicare 2-3 clip per ferite chirurgiche per chiudere l'incisione. Somministrare l'analgesia (usiamo 5-10 mg/kg di carprofene utilizzando un'iniezione sottocutanea) e posizionare il topo in posizione sdraiata laterale nella gabbia di recupero. Garantire il mantenimento della temperatura corporea con il calore di una lampada o di un termoforo. Osservare il completo recupero del mouse, che dovrebbe avvenire in meno di 15 minuti.
- I topi devono essere osservati per le successive 24 ore per segni di dolore post-operatorio, sanguinamento e/o altre complicanze. Ispezionare regolarmente le incisioni chirurgiche per segni di infezione.
- Rimuovere le clip della ferita con il dispositivo di rimozione chirurgica della clip della ferita 7-14 giorni dopo l'intervento.
