Estrazione di rene intatto dal topo: una tecnica per ottenere rene senza capsula renale da modelli murini

In questo articolo

Abstract

Fonte: Grainger, N. et al. Isolamento e imaging delle regioni del pacemaker intatte e dal vivo della pelvi renale del topo mediante sezionamento del vibratomo. J. Vis. Exp. (2021)

In questo video, descriviamo la procedura per l'estrazione del rene dallo spazio retroperitoneale del topo. Il rene estratto può essere ulteriormente sezionato per ottenere un rene intatto senza capsula renale e lo strato di grasso circostante.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Dissezione renale

Anestetizzare i topi mediante inalazione di isoflurano al 3-4% in una cappa ventilata. Confermare l'induzione dell'anestesia profonda mediante perdita del riflesso di pizzicamento dell'alluce e/o della coda e quindi sopprimere i topi mediante lussazione cervicale.
Applicare etanolo al 70% sul torace per inumidire il pelo. Utilizzando le forbici per dissezione esterna, aprire la cavità addominale tramite un'incisione longitudinale, con le lame delle forbici angolate lontano dall'animale per evitare danni agli organi interni.
Usando una pinza per tessuti interni e forbici per dissezione interna, pizzica gli intestini e sollevali dalla parete addominale. Mentre sollevi l'intestino, taglia la parte inferiore dell'intestino dal corpo in corrispondenza del duodeno prossimale e del colon distale per accedere allo spazio retroperitoneale contenente i reni.
Una volta che i reni sono esposti, estrarli singolarmente. Pizzicare delicatamente e sollevare l'estremità distale dell'uretere (~4 mm di distanza dal rene) con una pinza per tessuti. Usando le forbici da dissezione, tagliare sotto l'uretere pizzicato verso il rene. Continuare a tagliare sotto il rene fino a quando non viene liberato dal tessuto connettivo circostante.
nota: Per massimizzare l'integrità dei tessuti e la consistenza del taglio durante la sezione del vibratomo, il rene deve essere il più integro possibile. Per garantire ciò, evitare di pizzicare o tagliare il rene con pinze e forbici da dissezione.
Metti il rene con l'uretere attaccato in una soluzione di KRB ghiacciata. Ripetere le fasi di estrazione con il rene controlaterale per rimuoverlo dal corpo del topo. Mantenere i reni in soluzione KRB su ghiaccio.
NOTA: Procedere immediatamente alla sezione successiva del protocollo per preservare la vitalità tissutale della PKJ. A causa della sua posizione anatomica in profondità nel parenchima renale, la PKJ è priva di contatto con la soluzione di KRB.

2. Prepara il rene senza capsula renale per il sezionamento del vibratomo

Trasferire il rene in una capsula di dissezione rivestita di elastomero siliconico (60 mm x 15 mm) e riempirla con una soluzione di KRB ghiacciata fino a quando il rene non è completamente sommerso.
Sotto un microscopio da dissezione, ancorare il rene alla base del piatto inserendo spilli minuziosi nell'uretere prossimale e attraverso la sottile capsula renale anteriore o il tessuto adiposo circostante><. nota: Fare attenzione a non perforare il tessuto del parenchima renale.
Usa forbici a molla sottili e pinze interne per rimuovere il tessuto adiposo dalla base del rene per esporre il RP distale e l'uretere prossimale.
Rimuovere l'uretere prossimale e una parte dell'RP distale dalla base dell'RP utilizzando le forbici a molla fine.
nota: Fare attenzione a non tagliare il parenchima renale circostante. La linea tratteggiata nera nella Figura 1A indica la posizione approssimativa di questo taglio. Questo taglio crea una base piatta sul rene per un sezionamento più uniforme dei tessuti. Quando si seziona il rene, si deve essere consapevoli della posizione anatomica della regione PKJ. La Figura 1B mostra che il rene intatto può essere tagliato lungo un piano sagittale per esporre il midollo, la papilla (midollo distale dove convergono i dotti collettori) e la RP prossimale e distale. Se la papilla dovesse essere esposta completamente, come nella Figura 1C, è possibile visualizzare la PKJ e l'RP prossimale (RP prossimale). Tuttavia, questo non dovrebbe essere fatto per la tecnica del vibratomo; questa descrizione serve a orientare il lettore verso la posizione PKJ in generale, enfatizzata dalla differenza anatomica mostrata nelle immagini a luce trasmessa della regione PKJ e della regione RP media nella Figura 1D, E.
Forare la capsula renale esterna con una pinza a punta fine, allontanando le punte dal corpo del rene. Usando una pinza con ciascuna mano, pizzica le estremità libere della capsula e staccale. Continuare a staccare la membrana della capsula renale rimanente fino a quando non viene rimossa completamente.
nota: La capsula renale è uno strato duro e fibroso che circonda il rene. Deve essere rimosso prima del sezionamento del vibratomo per un taglio ottimale.

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Risultati

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Figura 1: Anatomia renale di base e posizione della regione del pacemaker PKJ.(A) Diagramma del rene intatto che mostra l'orientamento del RP e dell'uretere. L'arteria renale e la vena renale sono visualizzate rispettivamente in rosso e blu. (B) Il rene intatto può essere tagliato lungo un piano sagittale per esporre l'aspetto interno del rene, compreso il midollo, l...