Xenotrapianto tumorale derivato da paziente: una tecnica per generare un modello murino sperimentale per la valutazione del carcinoma a cellule uroteliali

In questo articolo

Abstract

Fonte: Moret, R. et al. Modelli di xenotrapianto ortotopico derivati da pazienti per il carcinoma a cellule uroteliali umane e il cancro del colon-retto, la crescita tumorale e le metastasi spontanee. J. Vis. Exp. (2019)

Questo video descrive la procedura per generare un modello murino sperimentale di xenotrapianto, che può essere utilizzato per studiare la progressione del carcinoma a cellule uroteliali.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Modello di topo UCC

Preparazione dei topi per la procedura
1. Procurarsi un topo femmina NOD/SCID di età compresa tra 6 e 8 settimane. Radere la parte bassa della schiena del mouse usando una crema depilatoria. Anestetizzare il topo in una camera di induzione con isoflurano (2,5% in ossigeno al 100%, 1 L/min).
2. Una volta sedato, posizionare il topo in posizione supina con il muso in un cono nasale di isoflurano e il dorso nudo saldamente radicato su un elettrodo dispersivo><. NOTA: Il mouse è completamente sedato se non risponde al pizzicamento delle dita.
Prelevare le cellule tumorali UCC raccolte e risospenderle in un terreno RPMI da 50 μL. Instillare le cellule UCC nella vescica utilizzando un angiocatetere (Figura 1Aa, Ab).
1. Installare una macchina per elettrocauterizzazione monopolare e impostarla ad una potenza di 4 W. Lubrificare un atleta sterile da 24 G con gelatina lubrificante e inserirlo attraverso l'uretra della femmina di topo.
  NOTA: Si può avvertire una leggera resistenza. Spingere delicatamente in avanti o rimuovere l'angiocatheter e ripetere. Se il catetere si piega all'ingresso, inserire un filo guida sterile a metà nel catetere per garantire la stabilità.
2. Inserire completamente il filo guida diritto con nucleo fisso da 0,025" 1 mm oltre l'estremità dell'angiocatheter.
  NOTA: Il filo viene contrassegnato con nastro adesivo prima della procedura per indicare il punto di arresto di 1 mm e garantire la coerenza.
3. Tenere il perno monopolare sul filo guida per 1 s, consentendo l'irritazione elettrica della mucosa vescicale.
4. Collegare un nuovo angiocatheter sterile a una siringa Luer-Lok da 1 cc e prelevare 200 μL di cellule raccolte.
  NOTA: Almeno 100 μL vengono persi dall'angiocatetere alla siringa. Compensare il volume di perdita quando si calcola il volume di sospensione cellulare necessario.
5. Rimuovere il filo guida e l'antinfortunio dall'uretra del topo. Inserire l'angiocatheter con una siringa di cellule attaccate nell'uretra.
  NOTA: L'avanzamento dovrebbe essere più facile di prima.
6. Instillare 50 μL di cellule nella vescica del topo. Attendere qualche secondo prima di rimuovere l'anagiocatetere per consentire alle cellule di aderire alla parete della vescica.
  NOTA: Le cellule rimangono nella vescica e si sviluppano in un tumore primario.

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Risultati

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Figura 1: Modelli murini ortotopici UCC. (aa) Un angiocatetere è stato inserito nella vescica di una femmina di topo NOD/SCID e una scarica elettrocauterica è stata applicata alla parete della vescica tramite un filo guida. (Ab) Le cellule tumorali UCC marcate con luciferasi, BlCaPt15 (2 x 10⁴ cellule) o BlCaPt37 (5 x 10⁵ cellule) con l'aggiunta...