Preparazione del rene di ratto decellularizzato: una procedura per generare un'impalcatura acellulare vascolarizzata dell'intero organo da un rene di ratto raccolto

Abstract

Fonte: Kim, E. H. et al. Preparazione di scaffold renali decellularizzati nei ratti. J. Vis. Exp. (2021)

Questo video descrive la preparazione di un rene di ratto decellularizzato. L'impalcatura vascolare acellulare ottenuta può fungere da piattaforma promettente per l'ingegneria tissutale di innesti di organi.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Prelievo di rene e decellularizzazione

1. Raccogliere il rene sinistro con l'aorta addominale e la vena cava inferiore.
2. Legare l'uretere, l'aorta toracica, la vena cava superiore e i rami dell'aorta addominale.
3. Mantenere l'organo idratato nel PBS di Dulbecco (DPBS) in una capsula di Petri da 10 cm.
4. Incannulare l'aorta addominale e la vena cava inferiore con un catetere 23G. Per rimuovere il sangue residuo, collegare la cannula con una pompa peristaltica e lavare con DPBS (500 mL) e 16 U/mL di eparina per 90 minuti a una velocità di 5 giri/min a 37 °C.
5. Per decellularizzare il rene, perfondere il rene con Triton X-100 all'1% (1 L) per 3 ore e poi con una soluzione di dodecil solfato di sodio (SDS) allo 0,75% (2 L) per 6 ore a una pressione costante di 40 mmHg.
   nota: Il rene diventerà trasparente dopo 8 ore.
6. Per rimuovere la SDS residua, perfondere il campione con penicillina all'1% in acqua distillata (6 L) per 18 ore (durante la notte) e poi con DPBS sterile (500 mL) e 16 U/mL di eparina per 90 minuti.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Tubo in polietilene 50, tubo per catetere da 100 piedi	Braintree Scientifico	.023" × .038"
3-0 Accesso vascolare/legatura della bobina di seta nel ratto	Braintree Scientifico	SUT-S 110
Forbici fini per tagliare la fascia/tessuto connettivo	Strumenti per la scienza	Codice 14058-09
Ago guida da 25 pollici (per cateteri vascolari)	Becton Dickinson	305145
Morsetti vascolari Schwartz microserrefine	Strumenti per la scienza	18052-01 (dritto)
5-0 Accesso vascolare/legatura del rocchetto di seta nel topo	Braintree Scientifico	SUT-S 106