Modello murino di ostruzione ureterale unilaterale: una procedura chirurgica per ostruire il flusso urinario da un rene in modelli murini

Abstract

Fonte: Yanai, K. et al. Valutazione quantitativa della PCR in tempo reale delle espressioni di microRNA nel rene di topo con ostruzione ureterale unilaterale. J. Vis. Exp. (2020)

Questo video mostra la procedura per generare un modello murino di ostruzione ureterale unilaterale. La procedura prevede il taglio di uno degli ureteri del topo per ostruire il flusso di urina.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. La chirurgia UUO

1. Preparare i seguenti elementi: isoflurano, foglio di sughero, crema depilatoria, salviette da laboratorio, piastra di Petri con PBS, seta 4-0, nylon 4-0, una siringa da 2,5 ml, tamponi di cotone, pinzette, forbici chirurgiche e topi maschi C57BL/6 di 8 settimane.
2. Anestetizzare un topo con isoflurano all'1,5% e mantenerlo all'1,5%. Quindi, applicare la crema depilatoria sull'addome del topo. Dopo alcuni minuti, rimuovere la crema depilatoria con una salvietta da laboratorio imbevuta di PBS.
3. Iniettare etanolo al 70% nell'addome del topo e posizionare il topo in posizione supina sul foglio di sughero.
4. Usando forbici e pinzette chirurgiche, praticare un'incisione nella pelle all'addome e tagliare il muscolo e la membrana peritoneale dalla vescica al bordo inferiore sinistro delle costole.
5. Posizionare la siringa da 2,5 ml sotto il mouse. Prendi due batuffoli di cotone e inumidiscili con PBS. Tirare delicatamente l'intestino di lato con le pinzette e posizionare i tamponi inumiditi in modo appropriato per identificare l'uretere sinistro. Usando le pinzette, solleva il rene sinistro.
6. Utilizzare la seta 4-0 per legare l'uretere sinistro in due punti a circa 1 cm di distanza. Tagliare l'uretere nel punto centrale delle due legature e quindi utilizzare suture di nylon 4-0 per chiudere la membrana peritoneale e l'incisione.