Isolamento dei glomeruli: una tecnica per ottenere glomeruli intatti dal rene murino

Abstract

Fonte: Eymael, J. et al. Crescita glomerulare come test ex vivo per analizzare i percorsi coinvolti nell'attivazione delle cellule epiteliali parietali. J. Vis. Exp. (2020)

Questo video descrive il metodo per isolare i glomeruli intatti dai reni di topo. I glomeruli incapsulati e decapsulati così ottenuti possono essere ulteriormente utilizzati per la coltura di escrescenze di cellule epiteliali parietali dal rene murino.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

NOTA: Topi sani di tipo selvatico (WT) (n = 4) e cd44-/- (n = 4) non trattati sono stati sacrificati all'età di 12-16 settimane. Sono stati utilizzati sia topi maschi che femmine. Tutti i topi erano sullo sfondo C57Bl/6.

1. Dissezione del rene del topo

1. Sacrificare topi WT sani o topi geneticamente modificati a causa della lussazione cervicale.
2. Seziona i reni interi del topo ....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
piastra per coltura cellulare a 24 pozzetti	Costar di Corning
Microscopio digitale a luce invertita	Westburg, microscopio EVOS fl
Medium dell'aquila modificata di Dulbecco	Lonza
Siero fetale bovino	Lonza
La soluzione salina bilanciata di Hanks	Gibco
Petri	Sarstedt		Taglia 100
bisturi	Dahlhausen		Taglia 10
Setacci	Endecotts Ltd		Dimensioni: 300 μm, 75 μm, 53 μm, acciaio
Micropiastre ad attacco ultrabasso	Costar di Corning		Piastre a 6 pozzetti
siringa	BD Plastipak		Formato: 20 mL