Preparazione di blocchi di sferoidi tumorali mediante congelamento rapido: una procedura per conservare gli sferoidi tumorali in blocchi di matrice congelati

Abstract

Fonte: Wang, Y. et al. 3-D Sistema di coltura cellulare per lo studio dell'invasione e la valutazione delle terapie nel cancro della vescica. (2018)

Questo video dimostra la preparazione di blocchi di sferoidi tumorali mediante congelamento rapido, una tecnica in cui un campione di tessuto di interesse viene congelato a una temperatura ultrafredda, trattenendo gli sferoidi all'interno della matrice.

Protocollo

1. Preparazione di un blocco di campioni contenente sferoidi tumorali per il sezionamento di tessuti congelati

1. Sollevare con cautela il blocco di gel di collagene e gli sferoidi dai vetrini della camera utilizzando una piccola pinza. Posizionare il blocco di gel di collagene in uno stampo istologico di plastica.
2. Sciacquare brevemente il gel di collagene con 1x PBS e poi fissarlo con il 4% di paraformaldeide (PFA) in PBS per 30 minuti a temperatura ambiente.
   nota: Il PFA è un potenziale cancerogeno e deve essere maneggiato con cura.
3. Lavare il gel di collagene con 1,5 ml di 1x PBS su uno shaker per 15 minuti. Sostituire il PBS e ripetere il passaggio di lavaggio precedente 3 volte.
4. Applicare uno strato sottile (circa 3 mm) di composto per la temperatura di taglio ottimale (OCT) per coprire il fondo di un nuovo stampo istologico in plastica. Posizionare il gel di collagene fissato e lavato sopra il composto OCT, quindi incorporare con cura l'intero gel riempiendo lo stampo con il composto OCT evitando la formazione di bolle d'aria nell'OCT.
5. Lasciare lo stampo a 4 °C per 1 h.
6. Posizionare lo stampo contenente il campione e il composto OCT su una piastra di Petri da 100 mm che galleggia su azoto liquido. Lasciare che il campione si congeli completamente.
7. Conservare il blocco campione congelato a -80 °C per un uso futuro.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Terreno di coltura cellulare DMEM	Thermo Fisher Scientifico	11995065
Siero fetale bovino	Thermo Fisher Scientifico	26140079
Antibiotico-antimicotico (100x)	Thermo Fisher Scientifico	15240062
Albumina sierica bovina (BSA)	Sigma-Aldrich	Pannello A3803
Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS), pH 7,4	Thermo Fisher Scientifico	10010023
Collagene di tipo 1 da coda di ratto, high concentrazione	Corning	354249
Nunc Lab-Tek II Camerato Vetro di copertura	Thermo Fisher Scientifico	155382
Soluzione di paraformaldeide	Scienze della microscopia elettronica	Codice: 15710
Composto O.C.T	Thermo Fisher Scientifico	23730571