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Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Animale anestetizzante
- Utilizzare un sistema di anestesia da tavolo per anestetizzare l'animale con isoflurano. Accendere il serbatoio O2 e regolare il flussometro di ossigeno a 1 L/min.
- Posizionare una femmina adulta di topo C57BL/6J nella camera di induzione. Accendi e regola il vaporizzatore di isoflurano al 3% per l'induzione. Il topo deve essere in anestesia entro 2 minuti. Somministrare analgesico buprenorfina (0,1 mg/kg) per via sottocutanea dopo la rimozione del topo dalla camera di induzione per analgesia preventiva.
nota: In questo protocollo vengono utilizzati topi femmine, poiché sono più facili da lavorare durante il cateterismo dell'uretra. Il protocollo funziona anche per i topi maschi, ma è necessaria una maggiore cautela.
- Applicare un unguento oftalmico sugli occhi dell'animale per prevenire la secchezza. Posizionare il mouse anestetizzato rivolto verso l'alto su un termoforo con il naso nel cono. Ruotare l'interruttore del circuito dell'aria per far passare l'isoflurano attraverso il cono
.
- Trattenere la testa e il cono del naso con del nastro adesivo. Regolare il vaporizzatore di isoflurano al 2% per la manutenzione.
- Trattenere gli arti con del nastro adesivo. Eseguire test di pizzicamento delle dita dei piedi per assicurarsi che l'animale sia in anestesia profonda e quindi radere la zona addominale.
2. Deplezione delle urine e risciacquo della vescica
- Applicare lubrificante sul catetere (24 G, lunghezza 2,11 cm, diametro esterno 0,045 cm) e assicurarsi che la superficie esterna sia completamente coperta.
- Inserire il catetere nell'apertura dell'uretra e spingerlo lentamente fino a raggiungere la vescica, momento in cui l'urina dovrebbe defluire attraverso il catetere. Premere delicatamente l'addome per favorire l'esaurimento delle urine.
- Controllare se il catetere è inserito correttamente nella vescica osservando il deflusso automatico dell'urina. Evitare di perforare l'uretra e la parete della vescica e applicare il lubrificante più volte se necessario.
- Gettare l'urina con una pipetta in un becher per rifiuti.
- Pipettare 80 μl di soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) nell'estremità esterna del catetere, con l'altra estremità ancora nella vescica. Collegare con cautela una siringa da 1 ml al catetere. Spingere delicatamente la siringa per iniettare il PBS nella camera d'aria. Lasciare un po' di PBS nel catetere per evitare di creare bolle d'aria nella vescica.
- Rimuovere la siringa. Attendere che il PBS fuoriesca dalla vescica. Premere delicatamente l'addome per evacuare la PBS.
- Gettare il PBS nel catetere con una pipetta nel becher dei rifiuti.
- Ripetere il lavaggio PBS (passaggi da 2.4 a 2.6) altre due volte.
nota: È essenziale lavorare delicatamente durante queste fasi di lavaggio. Il sangue nel catetere o il mancato deflusso automatico del liquido di solito indicano che l'uretra è perforata