Isolamento di cellule mononucleate dal cervello di topo: una tecnica di centrifugazione a gradiente di densità per isolare le cellule mononucleate residenti nel cervello

Abstract

Fonte: Ji, Z. et al. Analisi citometrica a flusso dell'infiltrazione di linfociti nel sistema nervoso centrale durante l'encefalomielite autoimmune sperimentale. J. Vis. Exp. (2020)

In questo video, eseguiamo l'isolamento di cellule mononucleate dal cervello di un topo utilizzando la centrifugazione a gradiente di densità. La sospensione di cellule mononucleate isolate può essere utilizzata per ulteriori analisi a valle.

Protocol

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Preparazione della sospensione a cellula singola dal cervello

1. Diluire il terreno del gradiente di densità in rapporto 9:1 con PBS in una provetta conica da 15 mL per ottenere una soluzione finale al 100%.
2. Anestetizzare i topi al picco di EAE con un'iniezione intraperitoneale di pentobarbital sodico all'1% (50 mg/kg) e perfondere per via intracardica con 20 ml di PBS sterile ghiacciato. Per raggiungere questo obiettivo, iniet....

Results

Figura 1: Schema della configurazione del gradiente Percoll per l'isolamento di celle mononucleate.

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Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Omogeneizzatore a dounce	Wheaton	353107542
Percoll	Ge	Codice 17-0891-01