Isolamento degli astrociti: un metodo per ottenere una preparazione pura di astrociti corticali di topo

Abstract

Fonte: Schildge, S. et al. Isolamento e coltura degli astrociti corticali di topo. J. Vis. Exp. (2013)

In questo video, descriviamo il metodo per ottenere una preparazione pura di astrociti da topi appena nati.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Isolamento e placcatura di cellule corticali miste

L'isolamento di cellule corticali miste per colture di astrociti può essere eseguito utilizzando cuccioli di topo da P1 a P4. Per ottenere una corretta densità di astrociti è necessario utilizzare 4 cortecce di cuccioli di topo per pallone di coltura tissutale T75. Pertanto, i volumi nel seguente protocollo vengono calcolati per una preparazione cellulare utilizzando 4 c....

Risultati

Figura 1. Dissezione della corteccia di topo postnatale (P3). A) Cervello intero. B) Cervello dopo la rimozione dei bulbi olfattivi e del cervelletto. C) Isolamento delle cortecce staccando la struttura a placche della corteccia dal cervello. D, D') Corteccia dal sito ventrale e dorsale con meningi (le frecce nere indicano le arterie meningee). E) Corteccia senza meningi. Barra graduat.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Terreni di coltura di astrociti
DMEM alto glucosio	Tecnologie per la vita	Codice 31966-021
FBS inattivato a caldo	Tecnologie per la vita	Codice 10082-147	Concentrazione finale: 10%
Penicillina-Streptomicina	Tecnologie per la vita	Codice: 15140-122	Concentrazione finale: 1%
Soluzione per la digestione del tessuto cerebrale
S.b.B	Tecnologie per la vita	Codice 14170-088
2,5% Tripsina	Tecnologie per la vita	Codice 15090-046	Concentrazione finale: 0,25%
Altro
Etanolo al 70% (vol/vol)	Roth	9065.2
Poli-D-lisina	Millipor A-003	A-003-E
Acqua	PAA	S15-012	Grado di coltura cellulare
Pbs	PAA	H15-002	Grado di coltura cellulare
0,05% tripsina-EDTA	Tecnologie per la vita	Codice 25300-062
Filtro sterile da 0,45 μm	Sartorius	Codice: 16555
Piastra di Petri da 3,5 cm	Falco BD	353001
Tubo Falcon da 15 ml	Falco BD	352096
Tubo Falcon da 50 ml	Falco BD	Codice 352070
Pallone per coltura tissutale da 75 cm2	Falco BD	353136
Pinze fini	Dumont	2-1032; 2-1033	#3c; #5
Pinza a punta piatta	KLS Martin	12-120-11
Forbici chirurgiche da 13 cm	Esculap	BC-140-R
Stereomicroscopio	Leica		MZ7.5
Stereomicroscopio + Fotocamera	Leica		MZ16F; DFC320
Microscopio + Fotocamera	Zeiss; Canonico		Primo Vert; PowerShot A650 IS
centrifuga	Eppendorf	Codice: 5805000.017	centrifuga5804R
Agitatore orbitale	Termo Scientifico	SHKE 4450-1CE	MaxQ 4450
Bagnomaria	Julabo		SW20; 37 °C

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