Isolamento delle cellule cerebrali dalle larve di pesce zebra: una tecnica per ottenere neuroni, macrofagi e microglia intatti dal tessuto cerebrale del pesce zebra

Abstract

Fonte: Mazzolini, J. et al. Isolamento ed estrazione di RNA di neuroni, macrofagi e microglia da cervelli larvali di pesce zebra. J. Vis. Exp. (2018)

Questo video descrive un protocollo per isolare neuroni, macrofagi e microglia dal cervello larvale di pesce zebra interrompendo meccanicamente il tessuto cerebrale. Le popolazioni cellulari purificate possono essere ulteriormente utilizzate per l'analisi genomica.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono partecipanti umani sono state eseguite in conformità con le linee guida istituzionali, nazionali e internazionali per il benessere umano e sono state esaminate dal comitato di revisione istituzionale locale.

1. Omogeneizzazione

NOTA: Tutti i passaggi vengono eseguiti a 4 °C.

1. Aggiungere 1,5 mL di tricaina (15 mM) a piastre di Petri da 90 mm contenenti 50 larve in 50 mL di terreno embrionale E3 trattato con 200 μM di PTU per anestetizzarle terminalmente.
   1. Aspirare 10 larve anestetizzate dalle piastre di Petri con una pipetta....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
1-fenile 2-tiourea (PTU)	sigma	P7629
Hepes	Gibco	Codice 15630-056
D-glucosio	sigma	G8644-100ML
HBSS 1X	Gibco	Codice 14170-088
Percoll	GE Sanità	Codice 17-0891-02
HBSS 10X	Gibco	Codice 14180-046
DPBS 1X	Gibco	Codice 14190-094
Tricaina (MS222)	sigma	Codice: A5040
Sterilin piastre di Petri standard da 90 mm	ThermoFisher	101VIRR
Microforbici chirurgiche	Strumenti per la scienza	Codice 15000-00
Pipetta sfusa in plastica Pasteur da 3 ml	Sls	PIP4206
Omogeneizzatore di vetro	Wheaton	357538
Piastre di Petri standard Sterilin da 55 mm	ThermoFisher	P55V
Percoll	GE Sanità	Codice 17-0891-02
Filtro cellulare da 40 μm	Falcone	Codice 352340
Tubo conico in polipropilene da 50 ml	Falcone	Codice 352070
centrifuga	Eppendorf	5804 R
Siero di capra normale (NGS)	Segnalazione cellulare	5425S
Tappo del filtro cellulare da 35 μm	Bd	352235