Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.
1. Preparazione preoperatoria generale
- Digiunare i topi per 6 ore prima dell'intervento. Il cibo dietetico in gel è stato somministrato 3 giorni prima dell'intervento chirurgico ed esclusivamente un giorno prima dell'intervento. Indurre l'anestesia in una camera con isoflurano al 5% (0,4 L/min) e O2 (diossigeno; 0,4 L/min). Eseguire un test di pizzicamento delle dita dei piedi per confermare che l'anestesia sia efficace. Somministrare analgesici (0,1 mg/kg di buprenorfina), antibiotici (10 mg/kg di marbofloxacina) e procinetici (1 mg/kg di metoclopramide) tramite iniezioni sottocutanee.
- Assegnare un'area di lavoro specifica per le procedure chirurgiche (distante dal traffico del laboratorio e dai ventilatori di ventilazione). Pulire l'area chirurgica con disinfettanti per superfici dure dedicati. Posizionare un termoforo sull'area dello spazio di lavoro per mantenere l'omeotermia del mouse durante l'intervento chirurgico. Applicare un tampone inferiore pulito e assorbente sopra il termoforo.
- Radere l'addome dallo sterno al bacino usando un rasoio elettrico. Avvolgere l'addome del topo in un involucro di plastica sterilizzato (Figura 1A) e posizionare il mouse in posizione supina sul termoforo.
- Applicare un unguento veterinario sugli occhi per prevenire la secchezza durante l'anestesia. Posizionare il topo nel cono nasale e mantenere l'anestesia con isoflurano al 2% (0,4 L/min) e O2 (0,4 L/min).
- Prima di iniziare l'intervento, indossare un camice da visita sterile, una cuffia monouso, una maschera facciale e guanti sterili. Aprire una confezione autoclavata contenente un set di strumenti chirurgici sterilizzati, necessario per tutte le fasi dell'intervento. Taglia una finestra nell'involucro di plastica sterilizzato e disinfetta la pelle con 2 soluzioni successive di iodio povidone.
2. Bypass gastrico Roux-en-Y: procedura chirurgica
- Laparotomia mediana
- Al microscopio binoculare e con un bisturi, eseguire un'incisione sulla linea mediana dallo sterno al centro dell'addome per aprire la cavità addominale (non danneggiare i muscoli addominali). Proteggere la pelle con un impacco sterile imbevuto di soluzione salina a 37 °C (Figura 1B).
- Arto biliopancreatico e arto alimentare
- Esternalizzare l'intestino (Figura 1C). Misurare a 8 cm dal piloro ed eseguire due legature dell'intestino con 5,0 punti di sutura non assorbibili (Figura 1D).
- Tagliare l'intestino tra le due legature (Figura 1E). Posizionare l'arto prossimale delle due estremità nel quadrante superiore sinistro dell'addome. Nota: Questo sarà utilizzato come arto alimentare (Figura 1F).
- Posizionare l'arto distale delle due estremità rivolto verso l'arto alimentare 6 cm sotto l'arto prossimale (Figura 1F).
nota: Questo sarà usato come arto biliare.
- Digiuno-digiunostomia
- Tagliare sia l'arto prossimale che l'ansa intestinale utilizzando delle micro forbici ed eseguire due incisioni antitimesenteriche della stessa lunghezza (Figura 1G e 1H).
- Eseguire l'anastomosi da lato a lato con due suture 8.0 non assorbibili. Eseguire prima l'anastomosi del lato dorsale (Figura 1I), seguita dall'anastomosi del lato ventrale (Figura 1J).
- Arrotolare delicatamente 2 batuffoli di cotone inumiditi verso ciascun lato dell'anastomosi per assicurarsi che la sutura sia a prova di perdite. Completo di suture 8.0 non assorbibili in caso di perdite.
- Gastro-digiunostomia
- Mobilizzare delicatamente lo stomaco utilizzando tamponi di cotone inumiditi. Libera lo stomaco dai suoi attacchi laterali stretti del tessuto connettivo usando tamponi di cotone inumiditi o micro forbici.
- Esternalizzare delicatamente lo stomaco completamente, posizionando un impacco di collagene emostatico riassorbibile dietro lo stomaco. Eseguire una legatura del piloro utilizzando una sutura 5.0 non assorbibile fatta passare attraverso l'omento utilizzando micro pinze curve (Figura 1K e 1L).
- Tagliare sia il lato ventrale dello stomaco, a 1,5 cm dal piloro, sia l'arto distale utilizzando delle micro forbici, creando due incisioni della stessa lunghezza (Figura 1M).
- Eseguire l'anastomosi da lato a lato con due suture 8.0 non assorbibili. Iniziare con l'anastomosi del lato dorsale (Figura 1N), quindi eseguire l'anastomosi del lato ventrale (Figura 1O). Arrotolare delicatamente 2 tamponi di cotone inumidito verso ciascun lato dell'anastomosi per assicurarsi che la sutura sia a prova di perdite. Completo di suture 8.0 non assorbibili in caso di perdite.
- Chiusura addominale
- Chiudere lo strato muscolare della parete addominale utilizzando suture 5.0 non assorbibili (Figura 1P). Ridurre l'anestesia riducendo la concentrazione di isoflurano all'1%. Chiudere la pelle utilizzando suture 5.0 non assorbibili (Figura 1Q). Somministrare 25 ml/kg di soluzione salina calda tramite iniezione sottocutanea.
3. Assistenza postoperatoria generale
- Interrompere l'isoflurano e continuare con un flusso di O2 di 0,8 L/min fino a quando il mouse non è completamente sveglio. Non lasciare il topo incustodito fino a quando non riacquista il controllo motorio, indicato dall'animale che inizia a muoversi intorno alla gabbia ed è in grado di stare in piedi e camminare senza cadere.
- Posizionare il topo (un solo topo per gabbia) in un'incubatrice a una temperatura inferiore a 30 °C per 5 giorni.
- Mantenere l'integrazione di ferro (0,5 mg/kg/die; iniezione sottocutanea) e vitamine (800 mg/180 mL in acqua) nei topi RYGB fino alla fine del protocollo.
- Restituisci l'accesso gratuito agli alimenti dietetici in gel (dieta in gel ad alto contenuto di grassi: 10% strutto, 10% zucchero liquido, 57% acqua) per 5 giorni dopo l'intervento. Reintrodurre una dieta solida 3 giorni dopo l'intervento.
- Iniettare per via sottocutanea buprenorfina (0,1 mg/kg, due volte al giorno, dal giorno 0 al giorno 3 dopo l'intervento), meloxicam (1 mg/kg, dal giorno 0 al giorno 3 dopo l'intervento), metoclopramide (1 mg/kg, dal giorno 0 al giorno 5 dopo l'intervento) e marbofloxacina (10 mg/kg, dal giorno 0 al giorno 3 dopo l'intervento)
