Saggio di impedenza basato su array a tre camere: una tecnica di analisi in tempo reale per valutare il potenziale invasivo delle cellule tumorali misurando l'impedenza elettrica

Abstract

Fonte: Sharif, G. M. et al., Rilevamento e cattura in tempo reale di sottopopolazioni cellulari invasive da co-colture. J. Vis. Exp. (2022).

Questo video descrive un test di invasione utilizzando un array a tre camere basato sull'impedenza elettrica. Questa tecnica misura il potenziale invasivo delle cellule tumorali sotto l'influenza di fattori solubili secreti dalle cellule stromali residenti nei microambienti tumorali.

Protocol

1. Nuovo design della camera (Figura 1)

1. Aprire una nuova piastra dell'analizzatore di celle a doppia camera. Mettere da parte la camera superiore con gli elettrodi.
2. Utilizzando una fresatrice, radere 2 mm dei pozzetti inferiori a forma di U della piastra dell'analizzatore di celle.
3. Attacca una membrana in polietersulfone (PES) di 2 cm x 7 cm con pori di 0,2 μm sul fondo dei pozzetti rasati utilizzando un adesivo curato con UV. Attendere 30 minuti di cura per assicurarsi che la colla sia completamente indurita e inerte.
4. Utilizzando una fresatrice, ritagliare due fessure longitudinali (1,5 mm x 5,6 mm) lungo i lati per inserirle....

Results

Figura 1: Immagini delle camere di array e modifiche.

(A) Le tre camere utilizzate per costruire l'array. Non è stata apportata alcuna modifica alla camera superiore che ospita gli elettrodi. (B) Dai pozzetti della camera centrale è stata rasata un'altezza di 2 mm e una membrana è stata attaccata al fondo aperto; Su ciascun lato sono state.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
0,05% tripsina-EDTA	Thermofisher	Codice 25300-054
adesivo	Adesivo ottico Norland	NOA63
Albumina sierica bovina (BSA)	sigma	Codice: A9418
Sollevatore di celle	Sarstedt	83.1832
Tossina del colera da Vibrio cholerae	Thermofisher	Codice 12585-014
Piastra CIM	Agilent 5665817001		Piastra analizzatrice di celle
Collagenasi da Clostridium histolyticum	sigma	Codice: C0130
DMEM	Thermofisher	Codice 11995-065
DMEM-F12	Thermofisher	Codice 11875-093
Siero fetale bovino (FBS), inattivato a caldo	Omega Scientifico	FB-12
HEPES	Thermofisher	15630106
Siero per cavalli (HS)	Gibco	16050-122
EGF umano	Peprotech	AF-100-15
idrocortisone	sigma	H4001
Insulina transferrina selenio etanolammina (ITSX) (100x)	Thermofisher	51500056
Insulina, ricombinante umano, soluzione di zinco	sigma	Codice: C8052
Fibroblasti J2	Cellule staminali (RRID:CVCL_W667)	Codice 100-0353
LymphoPrep	Cellule staminali	Codice: 7851	Terreno a gradiente di densità per l'isolamento di cellule mononucleate
Matrigel	Corning	Codice 354230	Matrice della membrana basale
MCFDCIS.com celle (DCIS)	RRID:CVCL_5552
Celle MDA-MB-231	RRID:CVCL_0062
fresatrice			Bridgeport Serie 1 Verticale
Soluzione salina tamponata con fosfato (1x)	Thermofisher	10010049
Membrana in polietersulfone (PES)	Sterlitech	PCTF029030
Soluzione di lisi dei globuli rossi	Cellule staminali	7800
Analizzatore RTCA DP	Agilent	3X16	Analizzatore di celle a doppio scopo
tripsina	sigma	T4799