Saggio di screening dei nematocidi di piccole molecole: un metodo a medio rendimento per lo screening di potenziali nematocidi contro Ditylenchus dipsaci

Abstract

Fonte: Cammalleri, S. R., et al. Coltura e screening del nematode parassita delle piante Ditylenchus dipsaci. J. Vis. Exp. (2022).

In questo video, dimostriamo un test di screening per identificare l'efficacia dei nematocidi a piccole molecole contro i nematodi. I nematocidi sono considerati efficaci se causano una diminuzione del numero di nematodi mobili nel campione dopo l'esposizione.

Protocol

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE

1. Screening in vitro di piccole molecole

1. Preparare le piastre di analisi seguendo i passaggi seguenti.
   1. Versare l'acqua distillata autoclavata in un trogolo sterile e, utilizzando una pipetta multicanale, erogare 40 μl di acqua distillata dal trogolo in ciascun pozzetto di una piastra a 96 pozzetti a fondo piatto.
2. Preparare lo strumento di spillatura e aggiungere le sostanze chimiche.
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Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Bicchiere da 50 ml	pirex	CLS100050
Piastra a 96 pozzetti	Sarstedt	83.3924
Alluminio	Alcan Plus
cannocchiale di dissezione	Leica	Leica MZ75
Dmso	Sigma-Aldrich	472301-500ML
scivolo in vetro	Magna	60-1200
Carta assorbente priva di lanugine	V&P Scientifico	VP 522-100
Puntali per pipette a bassa ritenzione (200uL)	LABFORCE	Codice 1159M44
pipetta multicanale	Eppendorf research plus	3125000036
NaOH	Sigma-Aldrich	S8045-500G
parafilm	Bemis	PM-996
Soluzioni per la pulizia dei perni	V&P Scientifico	VP110A
Pinner	V&P Scientifico	VP381N
vaschette di risciacquo pinner	V&P Scientifico	VP 421
Serbatoio per reagenti con coperchio per pipette multicanale	Sigma-Aldrich	BR703459
incubatore a scuotimento	Nuovo Brunswick Scientifico	I26