Saggio della placca virale: una tecnica per misurare il virus infettivo dell'herpes simplex attraverso la quantificazione delle placche formate nel monostrato di cellule infettate da virus

Abstract

Fonte: Sadowski, L. A. et al. Plaquing dei virus dell'herpes simplex. J. Vis. Exp. (2021)

Questo video descrive il test della placca virale del virus infettivo dell'herpes simplex o HSV. Le particelle virali diluite vengono inoculate nel monostrato di cellule epiteliali. Dopo l'incubazione, il virus forma placche e viene contato visivamente per determinare il titolo del virus infettivo.

Protocollo

1. Semina delle cellule Vero

1. Il giorno prima di iniziare il test della placca, tripsinizzare le cellule Vero e risospenderle nel normale Dulbecco's Modified Eagles Medium (DMEM) e integrare secondo la metodologia standard di coltura cellulare. Risospendere le cellule tripsinizzate in 10 mL di DMEM per pallone T-75 delle cellule Vero confluenti (~10⁷ cellule).
   NOTA: Il DMEM viene utilizzato per i saggi della placca al posto dell'alfa-MEM perché rallenta leggermente il tasso di crescita cellulare e favorisce migliori risultati del saggio della placca.
2. Contare le cellule con il metodo preferito (ad esempio, un emoc....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Piastre a 12 pozzetti	Corning	3512
Piastre a 6 pozzetti	Corning	3516
Alfa-MEM	Lonza	Codice 12169F
Antibiotico/antimicotico	Gibco	15240096
Cristallo viola	Alfa Aesar	B2193214
DMEM	Gibco	11965092
PBS di Dulbecco (no Mg++ o Ca++)	Gibco	14190144
Siero fetale di vitello	Millipore-Sigma	TMS-013-B
L-alanil-L-glutammina (Glutamax)	Gibco	GS07F161BA
Emocitometro	Thermo Fisher	02-671-54
Metilcellulosa	Millipore-Sigma	Codice 27-441-0
Agente quaternario (Lysol I.C.)	Thermo Fisher	NC9645698
Tripan Blu	Corning	25900CI
tripsina	Citiva	SH30042.01
Celle Vero	ATCC	CCL-81