Saggio radiomarcato di captazione degli amminoacidi per quantificare l'assorbimento cellulare degli amminoacidi

Abstract

Fonte: Shen, L., et al. Valutazione del consumo di aminoacidi in cellule ossee in coltura e fusti ossei isolati. J. Vis. Exp. (2022).

Questo video dimostra una tecnica in vitro per stimare l'assorbimento di aminoacidi da parte delle cellule stromali derivate dal midollo osseo. I trasportatori di amminoacidi Na⁺-dipendenti mediano l'assorbimento degli amminoacidi radiomarcati all'interno delle cellule e l'assorbimento cellulare viene stimato misurando la radioattività.

Protocollo

L'uso di materiali radioattivi (RAM) richiede l'approvazione preventiva da parte di un comitato di sicurezza designato in ogni istituzione.

1. Assorbimento di aminoacidi nelle cellule

1. Piastra 5 x 10⁴ cellule ST2 in ciascun pozzetto di una piastra di coltura tissutale a 12 pozzetti. Cellule su piastra in α-MEM contenenti il 10% di FBS, 100 U/mL di penicillina e 0,1 μg/mL di streptomicina (Pen/Strep). Piastra pozzetti extra di cellule per quantificare il numero di cellule per condizione per le normalizzazioni nel passaggio 1.12. Incubare le cellule in un incubatore per colture cellulari umidificato a 37 °C con CO₂

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
0,25% tripsina	Gibco	Codice 25200
piastra a 12 pozzetti	Corning	3513
Contatore a scintillazione Beckman LS6500
cloruro di calcio	sigma	Visualizzazione del materiale C1016
cloruro di colina	sigma	Visualizzazione del materiale C7077
Soluzione di D-(+)-glucosio	sigma	G8769
DPBS	Gibco	Codice: 14190
HEPES(1M)	Gibco	Codice: 15630
L-[3,4-3H(N)]-Glutammina	PerkinElmer	NET551250UC
Fiale di scintilazione liquida	sigma	Z190535
soluzione di cloruro di litio, 8M	sigma	L7026
cloruro di magnesio	sigma	Codice: M8266
MEMα	Gibco	Codice: 12561
Provetta per microcentrifuga, 15mL	Biotix	Codice 89511-256
cloruro di potassio	sigma	P3911
bicarbonato di sodio	sigma	S6014
cloruro di sodio	sigma	S9888
Sodio dodecil solfato	sigma	436143
Ultima Gold (Soluzione a scintillazione)	PerkinElmer	6013329
Acido α-(metilammino)isobutirrico	sigma	Codice: M2383