Tecnologia di interferometria a biostrati per rilevare le interazioni tra ligando e analita

Abstract

Fonte: Desai, M., et al. Applicazione dell'interferometria a biostrato (BLI) per lo studio delle interazioni proteina-proteina nella trascrizione. J. Vis. Exp. (2019)

In questo video, dimostriamo la tecnologia dell'interferometria a biostrato (BLI) per rilevare le interazioni intermolecolari tra ligandi e analiti bersaglio in tempo reale. Il BLI misura i cambiamenti nel modello di interferenza della luce bianca riflessa da uno strato di ligandi immobilizzati sulla superficie di un biosensore mentre interagiscono con gli analiti in soluzione.

Protocol

1. Idratazione del biosensore e configurazione del saggio

1. Accendere la macchina BLItz.
2. Assicurarsi che la macchina sia collegata al computer tramite una porta di uscita dati USB sul retro della macchina.
3. Sul computer, apri il software associato (ad esempio, BLItz Pro) e fai clic su Advanced Kinetics sul lato sinistro dello schermo.
4. Sul software, digitare tutte le informazioni appropriate sull'esperimento (inclusi il nome dell'esperimento, la descrizione, l'ID del campione e la concentrazione di proteine) sotto ciascuna rispettiva intestazione.
5. Fare clic su Tipo di biosensore e scegli....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Macchina BLItz	ForteBio	45-5000	dispositivo
Vassoio per biosensore Ni-NTA Dip and Read	ForteBio	Codice 18-5101	Biosensori Ni-NTA pronti all'uso per proteine marcate con poly-His.
Porta gocce	ForteBio	45-5004	dispositivo
Provette per PCR (0,2 mL)	Thomas Scientific	CLS6571	Articoli in plastica
Provette per microcentrifuga (nere)	Thermo Fisher Scientifico	03-391-166	Articoli in plastica
Salviette Kimwipes	Thermo Fisher Scientifico	06-666A	Articoli in plastica
DTT	Thermo Fisher Scientifico	R0861	chimico
Edta	MilliporeSigma	E6758	chimico
MgCl2	MilliporeSigma	Codice: M8266	chimico
NaCl	MilliporeSigma	S9888	chimico
Tris-HCl	OroBio	T095100	buffer