Isolamento di cellule mononucleate del sangue periferico da Buffy Coats umani

Abstract

Fonte: Mily, A., et al. Polarizzazione di cellule derivate da monociti umani M1 e M2 e analisi con citometria a flusso su infezione da Mycobacterium tuberculosis. (2020)

In questo video, dimostriamo l'isolamento di cellule mononucleate del sangue periferico, PBMC, contenenti monociti e linfociti da un buffy coat umano mediante centrifugazione a gradiente di densità. Le PBMC isolate possono essere utilizzate per ulteriori analisi.

Protocol

Tutte le procedure che coinvolgono partecipanti umani sono state eseguite in conformità con le linee guida istituzionali, nazionali e internazionali per il benessere umano e sono state esaminate dal comitato di revisione istituzionale locale.

1. Preparazione dei media

NOTA: I dettagli su tutti i reagenti e i materiali di consumo sono forniti nella Tabella dei Materiali.

1. Terreno completo RPMI: Integrare RPMI 1640 con 1 mM di piruvato di sodio, 2 mM di L-glutammina, 10 mM di HEPES e 10% di siero fetale bovino inattivato termicamente (FBS). Evitare gli a....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Lymphoprep	Alere Technologies AS	11508545
RPMI 1640	Società di tecnologie per la vita	SH30096.01
EDTA (0,5 m)	Ospedale universitario Karolinska, Huddinge	N/A
Na-piruvato	GE Healthcare Scienze della vita	SH300239.01
L-Glutammina	GE Healthcare Scienze della vita	SH30034.01
HEPES	GE Healthcare Scienze della vita	SH30237.01
Siero fetale bovino (FBS)	Sigma-Aldrich	F7524