Isolamento delle cellule T basato sulla flottazione mediante smistamento cellulare attivato dalla galleggiabilità

Abstract

Fonte: Snow, T., et al. Isolamento, attivazione ed espansione delle cellule T basate sulla flottazione da campioni di cellule mononucleate di sangue periferico umano utilizzando microbolle. (2022)

Questo video dimostra l'isolamento delle cellule T dalle cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) utilizzando la tecnologia di selezione cellulare attivata da galleggiabilità funzionalizzata (BACS). La tecnica di isolamento prevede la selezione positiva delle cellule T CD3+ mediante marcatura delle cellule con anticorpi anti-CD3 biotinilati e separazione delle cellule legate agli anticorpi utilizzando microbolle legate alla streptavidina.

Protocol

1. Isolamento di cellule T con microbolle utilizzando la selezione positiva

NOTA: Questo protocollo descrive in dettaglio un approccio di selezione positiva CD3⁺ su piccola scala utilizzando SAMB.

1. Incubare 3 x 10⁸ PBMC ottenute commercialmente in 2,5 mL di tampone di separazione con anticorpo biotinilato anti-CD3 (OKT3) a una concentrazione di 25 ng di anticorpi per 1 milione di cellule (25 ng/M). Mescolare delicatamente pipettando su e giù e incubare a temperatura ambiente per 10 minuti.
2. Aggiungere microbolle di streptavidina (SAMB) in un rapporto di 0,5 (quantit....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anticorpo anti-CD3 umano (OKT3) della biotina	Bioleggenda	Codice 317320
Leucopaco	BioIVT	HUMANLMX100-0001129
PBMC umani normali	BioIVT	UMANOHLPB-0002562
Kit microbolle di streptavidina (include il tampone di separazione di Akadeum)	Akadeum	Codice 11110-000