Coltura di cellule T attivate da cellule mononucleate del sangue periferico umano

Abstract

Fonte: Mølgaard, K., et al. Monitoraggio in tempo reale della respirazione mitocondriale nelle cellule T primarie umane differenziate da citochine. J. Vis. Exp. (2021).

In questo video, descriviamo un protocollo per l'attivazione delle cellule T primarie umane. L'incubazione di cellule T naive con biglie magnetiche rivestite con anticorpi anti-CD3 e anti-CD28, seguita da un trattamento con interleuchina-2 o interleuchina-15, porta all'attivazione di cellule T naive e alla loro differenziazione e proliferazione in cellule T effettrici o di memoria.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono partecipanti umani sono state eseguite in conformità con le linee guida istituzionali, nazionali e internazionali per il benessere umano e sono state esaminate dal comitato di revisione istituzionale locale.

1. Coltura di linfociti T primari umani attivati

1. Scongelamento delle cellule (Giorno 1)
   1. Preriscaldare 10 mL di RPMI 1640 per campione a circa 37 °C.
   2. Prelevare il numero desiderato di fiale di cellule mononucleate del sangue periferico e conservarle temporaneamente su ghiaccio secco.
   3. Risospendere le cellule congelate in 10 mL di RPMI 1640 pr....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
piastra per coltura tissutale a 24 pozzetti	Nunc	142485
Perline anti-CD3xCD28	Gibco	Codice 11161D
X-VIVO 15	Lonza	BE02-060F
Siero Umano	Sigma Aldrich	H4522	Calore inattivato a 56 °C per 30 min
IL-15	Peprotech	200-02
IL-2	Peprotech	200-15
Lymphoprep	Tecnologie delle cellule staminali	Codice: 7801
Pbs	Thermo Fisher	10010023
RPMI 1640	Gibco-Thermo Fisher	61870036
Magnete per perline a cellule T DynaMag-2 Magnet	Thermo Fisher	Codice 12321D