Articolo metodologico

Isolamento selettivo di cellule T CD4+ Vδ1+ γδ da cellule mononucleate del sangue periferico umano

8 luglio 2025

In questo articolo

Abstract

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Fonte: Welker, C., et al. Isolamento ed ex vivo Coltura di cellule T Vδ1+CD4+γδ, un progenitore extratimico delle cellule αβT. J. Vis. Exp. (2015).

Questo video dimostra un protocollo per l'isolamento basato sulla marcatura magnetica di una popolazione a bassa concentrazione di cellule T CD4+Vδ1+γδ da cellule mononucleate del sangue periferico umano (PBMC). Utilizzando una combinazione di anticorpi anti-Vδ1 coniugati con FITC, microsfere magnetiche anti-FITC e perline superparamagnetiche rivestite con anticorpi anti-CD4, le cellule T CD4+Vδ1+ possono essere purificate con successo dalla popolazione PBMC.

Protocollo

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Tutte le procedure che coinvolgono partecipanti umani sono state eseguite in conformità con le linee guida istituzionali, nazionali e internazionali per il benessere umano e sono state esaminate dal comitato di revisione istituzionale locale.

1. Isolamento delle cellule T Vδ1

  1. Assumere <1 x 106 linfociti isolati per un FACS iniziale che determina la frequenza delle cellule T Vδ1 CD4.
    nota: La dimensione della popolazione di questa entità di cellule T può differire notevolmente tra gli individui e in base al loro stato immunologico. Tipicamente, circa l'1% delle cellule T sono

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Dichiarazioni

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Nessun conflitto di interessi dichiarato.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Soluzione salina tamponata con fosfatoSigma AldrichD8537
Buffer MACSMiltenyi BiotecCodice 130-091-222integrare con BSA e pre-raffreddare prima dell'uso
BsaMiltenyi Biotec130-091-376non obbligatoriamente da questo fornitore
anti-umano Vd1 FITC (clone: TS8.2)Termo ScientificoTCR2730non obbligatoriamente da questo fornitore
anti-umano CD3 PerCP (clone: SK7)BD Bioscienze345766non obbligatoriamente da questo fornitore o da questo fluorocromo
anti-umano TCRab PE (clone: T10B9.1A-31)BD Bioscienze555548non obbligatoriamente da questo fornitore o da questo fluorocromo
anti-umano CD4 VioBlue (clone: MT466)Miltenyi BiotecCodice 130-097-333non obbligatoriamente da questo fornitore o da questo fluorocromo
anti-umano CD8 APC-H7 (clone: SK1)BD BioscienzeCodice 641400non obbligatoriamente da questo fornitore o da questo fluorocromo
Kit MultiSort Anti-FITCMiltenyi BiotecCodice 130-058-701produce risultati migliori rispetto alle microsfere anti-FITC
Colonne MSMiltenyi BiotecCodice 130-042-201Pre-raffreddare prima dell'uso
Separatore MiniMACSMiltenyi BiotecCodice 130-042-102
Kit di isolamento positivo CD4Tecnologie per la vitaCodice 11331D

Ristampe e permessi

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Tag

Isolamento magnetico delle celluleanalisi tramite citometria a flussomicrosfere anti FITCmicrosfere con anticorpo anti CD4reagente di bloccaggio Fcseparazione tramite colonna magneticamarcatori di superficie cellularesmistamento cellulare immunologico

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