Un metodo di dissezione per la raccolta di linfonodi drenanti poplitei murini per l'imaging ex vivo

Abstract

Fonte: Rezende, R. M., et al. Visualizzazione della struttura dei linfonodi e della localizzazione cellulare utilizzando la microscopia confocale ex-vivo. J. Vis. Exp. (2019)

Questo video dimostra una tecnica di dissezione per raccogliere linfonodi drenanti poplitei dalle zampe posteriori del topo. I linfonodi svolgono un ruolo fondamentale nel collegare l'immunità innata e adattativa e la raccolta di linfonodi intatti, con una struttura tissutale e una vitalità cellulare preservate, può aiutare a studiare le risposte immunitarie locali e sistemiche.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Procedura chirurgica per rimuovere il linfonodo drenante popliteo

1. Eutanasia dei topi utilizzando l'asfissia da CO₂ seguita da lussazione cervicale.
2. Immobilizzare i topi in posizione prona sul tavolino acrilico con del nastro adesivo e applicare olio minerale con un batuffolo di cotone nel polpaccio e nel ginocchio (Figura 1A-D).
3. Eseguire un'incisione sulla linea mediana nel polpaccio dal tallone al ginocchio (Figura 1E, F).
4. Dissociare la muscolatura del polpaccio dalla pelle (Figura 1F, G).
5. Esporre la fossa poplitea (Figura 1G). Il linfonodo popliteo apparirà come una sfera traslucida nella fossa poplitea.
6. Rimuovere il linfonodo popliteo utilizzando una pinza curva per microchirurgia (Figura 1G).
7. In alternativa, girare il mouse in posizione supina e avvicinarsi alla fossa poplitea tra il bicipite femorale e il semitendinoso per la rimozione del LN popliteo eseguendo un'incisione della linea mediana nel polpaccio dal tallone al ginocchio seguita dalla dissociazione della muscolatura del polpaccio dalla pelle.
   nota: La fossa poplitea è una depressione poco profonda situata nella parte posteriore dell'articolazione del ginocchio. Aprire con cautela per vedere il linfonodo popliteo.

Risultati

Figura 1: Preparazione dei linfonodi poplitei. (A, B) Iniezione sottocutanea di master mix di anticorpi FACS nel cuscinetto della zampa. (C, D) 3 ore dopo l'iniezione, sopprimere il topo, immobilizzare il topo su una lastra acrilica con nastro adesivo (C) e applicare olio minerale sulla pelle addominale per prevenire la deposizione di pelo attorno all'incisione (D)....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Piatto di coltura Cellview	Greiner-Bio	627861	35x10 mm con fondo in vetro
Salviette Kimwipes	Marchio scientifico Kimtech	Codice: 7557	Formato 21 x 20 cm / 100 fogli per scatola
Pinze curve per microchirurgia	Strumenti chirurgici WEP	Personalizzato	12,5 cm
Forbici curve per microchirurgia	Strumenti chirurgici WEP	Personalizzato	11,5 cm